三氧化二砷載藥微球抗肝癌細(xì)胞的實驗研究.pdf

1、目的:
　　制備三氧化二砷(ATO)載藥微球并研究其緩釋特性，以肝癌細(xì)胞株HepG2、MHCC97H為研究對象，從細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲以及VEGF、MMP9mRNA表達(dá)水平等方面研究ATO及ATO載藥微球在體外對肝癌細(xì)胞的作用，為后期動物實驗研究奠定理論基礎(chǔ)，以期為肝癌的綜合介入治療提供新的思路和理論依據(jù)。
　　方法:
　　1.體外制備ATO載藥微球，計算其載藥量(LE％)和包封率(EE％)，以及釋藥實驗了解ATO載藥

2、微球的藥物緩釋規(guī)律;
　　2.CCK8檢測細(xì)胞增殖不同濃度(0、5、10、15、20ng/ml)ATO及ATO載藥微球?qū)Ω伟〩epG2、MHCC97H細(xì)胞作用不同時間(0、12、24、48、72、96h)增殖抑制的影響;
　　3.侵襲實驗觀察不同濃度(0、5、10、15、20ng/ml)ATO及ATO載藥微球處理48h后對HepG2、MHCC97H細(xì)胞侵襲的影響;
　　4.雙染法檢測HepG2、MHCC97H細(xì)胞經(jīng)不同

3、濃度(0、5、10、15、20ng/ml)ATO及ATO載藥微球處理48h后細(xì)胞凋亡;
　　5.RT-PCR檢測HepG2、MHCC97H細(xì)胞經(jīng)不同濃度(0、5、10、15、20ng/ml)ATO及ATO載藥微球處理24h、48h后VEGF，MMP9mRNA表達(dá)水平;
　　6.Western Blot檢測HepG2、MHCC97H細(xì)胞經(jīng)不同濃度(0、5、10、15、20ng/ml)ATO及ATO載藥微球處理24h、48h后V

4、EGF蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果:
　　1.CalliSpheres(@)可載藥栓塞微球（100-300μm）對ATO的最佳載藥時間為40min;1g粒徑為100-300μm的載藥微球，投入60mg(10mg/ml，6ml)的ATO，混合均勻后40min，可檢測其內(nèi)能荷載13.8±1.49mg ATO;包封率為25.0±1.34％;
　　2.CalliSpheres(@)載ATO栓塞微球（100-300μm）體外藥物釋放顯

5、示30min內(nèi)呈突釋特征，突釋量約達(dá)藥物總量的31.42％，48h時釋放量達(dá)47.17％;
　　3.ATO組及ATO載藥微球組在同一時間內(nèi)，濃度為0～20ng/ml，隨ATO濃度升高，HepG2、MHCC97H細(xì)胞的增殖抑制率表現(xiàn)為逐漸升高，兩組組內(nèi)比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05);ATO組及ATO載藥微球組在同一濃度內(nèi)，隨作用時間延長，HepG2、MHCC97H細(xì)胞的增殖抑制率表現(xiàn)為逐漸升高，但兩組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P

6、＞0.05);
　　4.ATO載藥微球與單藥ATO一樣，隨濃度增加其抑制HepG2、MHCC97H細(xì)胞侵襲能力明顯加強(qiáng);
　　5.同濃度的ATO載藥栓塞微球和單藥ATO在同等時間內(nèi)同樣能促進(jìn)HepG2、MHCC97H細(xì)胞凋亡;
　　6.同濃度的ATO載藥栓塞微球較單藥ATO在同等時間內(nèi)同樣能抑制促血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP9)水平。
　　結(jié)論:
　　1.CalliSpheres(