水通道蛋白9表達(dá)水平對(duì)三氧化二砷抗肝癌效果的影響.pdf

1、目的：通過(guò)將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染HepG2肝癌細(xì)胞，改變水甘油通道蛋白9（aquaglyceroporin9,AQP9）在細(xì)胞中的表達(dá)，研究其表達(dá)水平的改變對(duì)三氧化二砷（arsenic trioxide,As2O3)誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡及其生物學(xué)行為的影響。
　　方法：（1）采用四甲基偶氮唑鹽法（ methylthiazolyl tetrazolium,MTT）篩選As2O3對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖抑制作用的IC50值；（2）將重組

2、質(zhì)粒pEGFP-N1-AQP9和pshRNA-AQP9a轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞，通過(guò)熒光顯微鏡，RT-PCR和Western blot法檢測(cè)其表達(dá)；（3）將As2O3加入轉(zhuǎn)染后及未處理的HepG2細(xì)胞，MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率；流式細(xì)胞儀分析周期和凋亡情況；Transwell實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證遷移侵襲能力的改變；酶標(biāo)儀檢測(cè)Caspase-3活性。
　　結(jié)果：（1）在熒光顯微鏡下可觀察到綠色熒光的表達(dá),重組質(zhì)粒對(duì)AQP9有明顯的過(guò)表達(dá)及抑制表達(dá)作用；

3、（2）轉(zhuǎn)染 pEGFP-N1-AQP9組肝癌細(xì)胞的增殖抑制作用明顯大于單純 As2O3處理組，侵襲及遷移能力顯著減弱，細(xì)胞周期停滯在 G0/G1期，凋亡明顯多于單純 As2O3處理組，Caspase-3活性最高。（3）轉(zhuǎn)染pshRNA-AQP9a組細(xì)胞的增殖抑制作用及Caspase-3活性小于單純As2O3處理組，侵襲遷移能力強(qiáng)于單純As2O3處理組，細(xì)胞周期停滯在G0/G1期的數(shù)量及凋亡率較少。
　　結(jié)論：重組質(zhì)粒pEGFP-N