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文檔簡介
1、目的:研究腺樣囊性癌(adenoid cystic carcinoma,ACC)中ACC-2細(xì)胞在三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)作用下,ACC-2細(xì)胞生長情況及細(xì)胞中MDM2基因及蛋白表達(dá)的變化,進(jìn)一步分析As2O3促進(jìn)ACC-2細(xì)胞發(fā)生凋亡的具體機(jī)制。
方法:將腺樣囊性癌ACC-2細(xì)胞在體外進(jìn)行培養(yǎng)并將其分為實(shí)驗(yàn)組和對照組,實(shí)驗(yàn)組于細(xì)胞長至指數(shù)生長期時,向其中加入濃度分別為2、4、6、8μmol/
2、L的含As2O3的細(xì)胞培養(yǎng)液,對照組僅加入相同體積的全細(xì)胞培養(yǎng)液,在倒置顯微鏡下,持續(xù)觀察各時間段在不同濃度的As2O3溶液的刺激下,ACC-2細(xì)胞的生長與凋亡狀況變化,應(yīng)用熒光定量RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)分別檢測MDM2基因(24、48h)與MDM2蛋白(24、48、72h)的表達(dá)變化。
結(jié)果:
?。?)As2O3對ACC-2細(xì)胞的生長具有抑制作用,且伴隨著藥物濃度和作用時間的增加,細(xì)胞的生長抑制作用逐漸加強(qiáng),
3、顯微鏡下可見貼壁細(xì)胞出現(xiàn)縮小、變圓、脫落,細(xì)胞接觸減少間隙變大,胞膜完整,胞內(nèi)顆粒增多,細(xì)胞密度增大,胞核核分裂相減少呈空泡樣變,隨著時間和As2O3濃度增加,貼壁細(xì)胞減少,懸浮凋亡的細(xì)胞逐漸增多;
?。?)RT-PCR結(jié)果顯示MDM2 mRNA在各組細(xì)胞中均有表達(dá),且隨著As2O3溶液濃度不斷升高和作用時間延長,MDM2 mRNA的表達(dá)明顯下降,與對照組比較,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),各組兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P
4、<0.05);
?。?)免疫細(xì)胞化學(xué)檢測結(jié)果示MDM2蛋白主要在細(xì)胞核中表達(dá),細(xì)胞漿中存在少量表達(dá),MDM2蛋白在對照組ACC-2細(xì)胞中存在基礎(chǔ)表達(dá),ACC-2細(xì)胞在不同濃度As2O3刺激下,隨濃度及作用時間增加,陽性顆粒逐漸減少,平均光密度值(IOD/area)逐漸減小,即MDM2蛋白表達(dá)下降,不同As2O3濃度與作用時間各組,兩兩比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。MDM2蛋白的表達(dá)水平和As2O3的濃度及作用時間有明顯
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