三氧化二砷對LA-N-5細胞MYCNmRNA表達及細胞侵襲性的影響.pdf

1、背景：神經母細胞瘤(Neuroblastoma，NB)是兒童時期最常見的顱腦外實體腫瘤，其進展速度、耐藥性及預后等特點與MYCN基因mRNA的超量表達密切相關。由于其轉移早，惡性程度高，盡管采取積極的治療，目前5年生存率仍然極低，因此迫切需要尋找新的治療方法以改善NB的預后。三氧化二砷(As2O3)由我國學者首先用于急性早幼粒細胞性白血病(APL)的治療并取得了較好療效，但其作用機制不清，可能與促進腫瘤細胞凋亡、抑制瘤細胞生長等有關。A

2、s2O3分子作用機制及對NB細胞侵襲性的影響尚缺乏研究。
　　 目的：研究As2O3對LA-N-5細胞MYCN mRNA表達及其細胞侵襲力的變化，以探討As203對NB的作用機制。
　　 方法：實驗分兩部分，一、采用RT-PCR檢測As2O3作用前后LA-N-5細胞MYCN mRNA的變化；二、用Transwell小室檢測As2O3作用后LA-N-5細胞侵襲能力的變化。
　　 將LA-N-5細胞與不同濃度的As2

3、O3共同培養(yǎng)24h、48h和72h，提取RNA，反轉錄后行PCR，產物用瓊脂糖電泳，紫外凝膠掃描儀觀察電泳結果，并用凝膠成像儀附帶的圖像分析軟件，測定電泳條帶的光密度值，求出各濃度及時間點的平均值，以MYCN/GAPDH光密度比值表示單細胞MYCN mRNA表達水平相對值并做量化統(tǒng)計分析；用鋪有Matrigel的Transwell小室模擬哺乳動物的基底膜，光學顯微鏡觀察LA-N-5在As2O3作用后穿過膜的細胞數量，了解細胞侵襲能力改變

4、。
　　 結果：1.0.75μmol/L、1.5μmol/L、3.0μmol/L的As2O3作用48小時均可使LA-N-5細胞MYCN mRNA的表達減少，以3.0μmol/L組最明顯，MYCN/GAPDH光密度比值分別為0.89±0.03，0.98±0.05，0.52±0.03，對照組為1.21±0.02，與對照組相比，P均<0.01；2.相同濃度下(3.0μmol/L)，As2O3作用48h后MYCN mRNA的表達明顯降低

5、，延長時間后抑制作用仍能保持，24h、48h、72h MYCN/GAPDH光密度比值分別為1.18±0.04、0.64±0.03、0.86±0.01，對照組為1.15±0.02，與對照組相比，P值分別為0.081、0.000、0.000；3.以上述三個濃度的As2O3作用24h后，LA-N-5細胞穿過matrigel侵襲膜的細胞數均較對照組減少，分別為28.00±4.00、19.33±4.16、6.33±1.53，對照組為46.33±6