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文檔簡(jiǎn)介
1、背景及目的:
三氧化二砷(Arsenic trioxide,ATO)是中藥砒霜的主要有效成分,近年來大量的研究表明三氧化二砷除了能治療血液系統(tǒng)疾病外,對(duì)包括胃癌在內(nèi)的多種惡性實(shí)體瘤也有強(qiáng)大的抗癌作用。胃癌是我國常見的惡性腫瘤,其對(duì)放、化療的敏感性均較低,死亡率高,晚期尚缺乏有效的治療手段,因此尋找新的治療藥物和治療手段乃當(dāng)務(wù)之急。
三氧化二砷可以誘導(dǎo)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡進(jìn)而抑制腫瘤生長(zhǎng)從而發(fā)揮治療作用,其分子機(jī)制
2、涉及多個(gè)凋亡調(diào)控分子。細(xì)胞凋亡失常參與了腫瘤發(fā)病過程的多個(gè)環(huán)節(jié)。Bcl-2基因(B-cell lymphoma/leukemia-2 gene,B細(xì)胞淋巴瘤或白血病基因-2),是從濾泡性淋巴瘤中分離出的一種癌基因,也是細(xì)胞凋亡抑制因子,具有抑制細(xì)胞凋亡、延長(zhǎng)細(xì)胞壽命的功能。目前認(rèn)為,Bcl-2家族中促凋亡因子和抗凋亡因子的相對(duì)表達(dá)水平至少部分決定了細(xì)胞對(duì)凋亡信號(hào)的反應(yīng)性。周期素D1(cyelin D1)基因是近年提出的重要的原癌基因,其
3、蛋白產(chǎn)物在細(xì)胞周期關(guān)鍵限速點(diǎn)G1/S期轉(zhuǎn)換中起重要正調(diào)控作用。Cyclin D1的異常調(diào)節(jié)將導(dǎo)致G1期縮短,細(xì)胞提前進(jìn)入S期,使細(xì)胞增殖失控從而形成腫瘤。
本研究應(yīng)用三氧化二砷作用于胃腺癌SGC7901細(xì)胞,觀察三氧化二砷對(duì)胃腺癌SGC7901細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期的影響,以及此過程中bcl-2、cyclinD1基因表達(dá)的改變,探討三氧化二砷誘導(dǎo)胃腺癌SGC7901細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
材料和方法:
1
4、.分別應(yīng)用不同濃度的三氧化二砷作用于胃腺癌SGC7901細(xì)胞,作用不同時(shí)間后采用MTT檢測(cè)法對(duì)細(xì)胞增殖活性進(jìn)行檢測(cè);采用流式細(xì)胞儀(FCM)AnnexinV/PI雙染法檢測(cè)細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡率;應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測(cè)bcl-2、cyclinD1基因的轉(zhuǎn)錄水平;用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)三氧化二砷對(duì)胃腺癌SGC7901細(xì)胞Bcl-2、Cyclin D1蛋白表達(dá)的影響。
2.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS
5、13.0軟件分析處理,連續(xù)型變量比較采用t檢驗(yàn),多樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析,分類變量比較采用卡方檢驗(yàn),相關(guān)性分析采用pearson相關(guān)分析。P<0.05作為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判定標(biāo)準(zhǔn)。
結(jié)果:
1.稍高濃度(≥21μmol/L)的三氧化二砷可抑制胃腺癌SGC7901細(xì)胞增殖,并有劑量和時(shí)間依賴性。
2.三氧化二砷可以誘導(dǎo)胃腺癌SGC7901細(xì)胞凋亡,隨著三氧化二砷濃度的增高,細(xì)胞凋亡數(shù)逐漸增高
6、,1μmol/L組與對(duì)照組比較細(xì)胞凋亡數(shù)差異無顯著性(P>0.05),而較高濃度組與對(duì)照組相比較細(xì)胞凋亡數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
3.三氧化二砷處理48h后細(xì)胞周期有了顯著的變化,G1期細(xì)胞百分比增加,S期細(xì)胞百分比下降,與對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。
4.逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCRl)檢測(cè)bcl-2、cyclin D1基因的轉(zhuǎn)錄水平,發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組bcl-2、cyclin D1基
7、因的表達(dá)與對(duì)照組相比明顯減低(P<0.01)。
5.用三氧化二砷處理后,胃腺癌SGC-7901細(xì)胞Bcl-2、Cyclin D1蛋白的表達(dá)都下降,且兩者之間有相關(guān)性,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=0.948,P<0.01)。
結(jié)論:
1.三氧化二砷可有效抑制胃腺癌SGC7901細(xì)胞增殖,誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,阻滯細(xì)胞周期,與作用劑量和作用時(shí)間呈正相關(guān)。這一過程可能與三氧化二砷抑制bcl-2、cyclin D1基因的
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