Caveolin-1提高白藜蘆醇衍生物誘導(dǎo)SGC7901細胞凋亡機制研究.pdf

1、目的:研究白藜蘆醇衍生物（Resveratrol derivatives）聯(lián)合Caveolin-1誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細胞致凋亡作用，探討CAV1在RES衍生物轉(zhuǎn)運入胞過程中是否亦有提高胞內(nèi)蓄積作用，且此過程是否需耗能。
　　方法：利用化學(xué)改構(gòu)手段合成新的RES衍生物；將攜帶有 CAV1全長片段(CAV1)、缺失信號轉(zhuǎn)導(dǎo)區(qū)域突變體1(缺失81-101位氨基酸骨架區(qū)，CAM1)、缺失脂質(zhì)結(jié)合區(qū)域突變體2(缺失143-156位氨

2、基酸脂質(zhì)結(jié)合區(qū)，CAM2)的突變載體以及CAV1沉默的RNAi載體，分別轉(zhuǎn)染SGC-7901細胞并通過相應(yīng)的生物素抗性標記篩選建立穩(wěn)定細胞株；各組細胞分別用RES及衍生物處理；MTT法檢測RES衍生物對人胃癌 SGC7901細胞生長的抑制情況；流式細胞儀（FCM）檢測RES衍生物對SGC7901凋亡和細胞周期的影響；丫啶橙/溴化乙錠(AO/EB)染色法從形態(tài)學(xué)鑒定細胞凋亡；高效液相色譜法(HPLC)檢測細胞內(nèi)藥物濃度；間接免疫熒光法測定

3、相關(guān)信號蛋白的定位和表達；Western Blot法檢測細胞內(nèi)蛋白的表達水平。
　　結(jié)果：MTT法以及FCM結(jié)果顯示RES衍生物均能不同程度誘導(dǎo)SGC7901細胞的凋亡，其中3,4’,5-三甲氧基芪(3,4’,5-tetranm-ethoxystib)活性最強，丹磺酰白藜蘆醇(resveratrol dansyl，RES-DAN)次之，強于RES。衍生物都具有明顯的劑量效應(yīng)和時間效應(yīng)。過表達CAV1能夠增強RES及衍生物抑制SGC

4、7901細胞增殖以及誘導(dǎo)細胞凋亡的作用。同時FCM結(jié)果也顯示50μM以上3,4’,5-三甲氧基芪處理各組細胞能使細胞周期阻滯于S期。AO/EB染色顯示SGC7901組以早期凋亡為主，而過表達 CAV1組細胞凋亡明顯增加，且以晚期凋亡為主。HPLC檢測到過表達CAV1組胞內(nèi)RES、已烯雌酚(Diethylstilbestrol，DES)、3,4’,5-三甲氧基芪三者的濃度要比相同因素處理下SGC7901組胞內(nèi)濃度高出1-2倍；腳手架區(qū)域缺

5、失的突變體CAM1組的胞內(nèi)藥物濃度與過表達CAV1組一致，可提高胞內(nèi)濃集1-2倍，而脂質(zhì)結(jié)合區(qū)域缺失的突變體 CAM2則沒有這一蓄積作用，RNAi組比SGC7901組略低?；瘜W(xué)合成RES的衍生物RES-DAN，結(jié)合間接免疫熒光技術(shù)檢測胞內(nèi)RES與CAV1的分布及定位情況。實驗發(fā)現(xiàn)：CAV1組，CAV1與RES-DAN兩者分布區(qū)域相同，存在完全共定位模式；在CAM2組中，則失去了與RES-DAN共定位模式。ATPase與CAV1及RES-

6、DAN也存在膜上共定位。ATPase水平隨CAV1的過表達而上升，兩者呈正相關(guān)。Western Blot結(jié)果顯示，隨著RES衍生物作用濃度的增加，CAV1蛋白表達增強，ATPase水平也逐漸增強。過表達CAV1能加強這種誘導(dǎo)作用。
　　結(jié)論：
　　1．本室自行研究合成的RES衍生物能有效誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細胞的凋亡，具有較強的體外抗腫瘤活性，其效率為3,4’,5-三甲氧基芪＞RES-DAN＞RES。
　　2．過