CD-TK雙自殺基因系統(tǒng)對腺樣囊性癌ACC-2細胞放療增敏的作用研究.pdf

1、目的：腺樣囊性癌（adenoid cystic carcinoma）又稱圓柱瘤（cylindroma），占涎腺腫瘤的5%～10%，在涎腺惡性腫瘤中占24%，其中在頜下腺及舌下腺中是居首位的惡性腫瘤，最多見的年齡是40～60歲。其主要的病理學(xué)特點為嗜神經(jīng)侵犯及易于遠處轉(zhuǎn)移，目前對腺樣囊性癌多主張采用手術(shù)聯(lián)合放化療的綜合治療為主，其五年生存率一般在60%左右，其10年、15年、20年生存率分別為30～39%、24～26%、12.5～21%，

2、其療效仍然不能令人滿意。因此，探討新的治療方法具有極其重要的意義。 近年來腫瘤的基因治療發(fā)展迅速，主要的方法有自殺基因、免疫基因、多藥耐藥基因以及抗血管生成基因等。其中自殺基因被認為是最有前景的基因治療方法之一。已有的研究證實雙自殺基因治療具有單自殺基因療法無可比擬的優(yōu)越性。王安訓(xùn)等[1]的研究也顯示HSV—TK/GCV系統(tǒng)具有放療增敏作用，可以提高放療對口腔鱗癌的敏感性。本研究旨在構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pIRES—CD及pIRES—

3、TK，并共同轉(zhuǎn)染ACC—2細胞，并應(yīng)用前體藥物干預(yù)，探討其對ACC—2細胞在有氧與乏氧條件下的放療增敏作用，以尋求更為有效的自殺基因治療方法。 方法：重組表達質(zhì)粒pIRES—CD及pIRES—TK以電穿孔方法共同轉(zhuǎn)染至ACC—2細胞，然后以400μg/mL新霉素（Geneticin G418）篩選10d后獲得穩(wěn)定表達CD及TK基因的ACC—2細胞，提取該細胞的總RNA，RT—PCR檢測CD、TK基因的表達。將陽性克隆的ACC—2

4、細胞分別在有氧及乏氧條件下給予0Gy、2Gy、4Gy、6Gy、8Gy、10Gy不同劑量X線照射及前體藥物GCV及5—FC干預(yù)，通過細胞克隆形成實驗，以探討雙自殺基因及前體藥物在有氧和乏氧條件下對ACC—2細胞放療增敏作用的影響。采用SPSS13.0軟件包對數(shù)據(jù)進行方差分析。 結(jié)果：RT—PCR檢測到ACC—2/CD—TK中CD、TK基因的表達。隨X線照射劑量的增大各組細胞放療后克隆形成率均明顯降低；有氧條件下X線照射ACC—2/

5、CD—TK+前體藥物組細胞存活分數(shù)均較相同照射劑量X線照射ACC—2及ACC—2/CD—TK細胞組低（P<0.05）；乏氧條件下X線照射ACC—2/CD—TK+前體藥物組細胞存活分數(shù)均較相同照射劑量X線照射ACC—2及ACC—2/CD—TK細胞組低（P<0.05）；相同照射劑量各相應(yīng)細胞組在有氧條件下細胞存活分數(shù)較乏氧條件下低。 結(jié)論： 1.應(yīng)用電穿孔的方法成功將pIRES—CD、pIRES—TK共同轉(zhuǎn)染ACC—2細胞，

6、并進行RT—PCR鑒定，獲得了預(yù)期的228bp和361bp的片段，表明了目的基因CD和TK已整合到ACC—2細胞染色體DNA鏈中，并進行有效的轉(zhuǎn)錄及表達。 2.有氧條件下雙自殺基因與其前體藥物共同作用對ACC—2細胞具有明顯的放療增敏作用而且作用優(yōu)于單自殺基因的應(yīng)用。 3.乏氧條件下雙自殺基因及其前提藥物系統(tǒng)同樣可以明顯提高ACC—2細胞的放療敏感性而且作用優(yōu)于單自殺基因的應(yīng)用。 4.相同照射劑量下各相應(yīng)細胞組在