偶聯(lián)雙基因靶點GNRs對TNBC放療增敏作用及其機制研究.pdf

1、背景與目的：
　　三陰性乳腺癌（triple-negative breast cancer，TNBC）作為乳腺癌分子亞型的一個分型，其分子及生物學行為具有多方面特殊性，并且具有放射敏感異質(zhì)性。其存在多個分子靶點的異常，這些異常分子靶點可通過不同機制影響腫瘤對電離輻射的反應，從而調(diào)節(jié)TNBC的放療敏感性。如何提高其放射治療敏感性和增益比成為 TNBC放射治療的瓶頸。我們設計并構(gòu)建偶聯(lián)整合素αvβ3特異性結(jié)合肽 RGD及血管內(nèi)皮生長因

2、子受體（vascular endothelial growth factor receptor，VEGFR）特異性抑制劑TKI-258雙基因靶點的多功能金納米棒顆粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）作為增敏劑，觀察在6MV-X線照射下TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD對TNBC細胞株MDA-MB-231細胞的放射敏感性的影響，并探討其可能存在的機制。
　　材料與方法：
　　本課題設計并構(gòu)建了一種新

3、型的基于介孔二氧化硅包覆的金納米棒顆粒，并通過表面化學修飾法偶聯(lián)整合素αvβ3特異性結(jié)合肽RGD及血管內(nèi)皮生長因子受體（VEGFR）特異性抑制劑TKI-258，使該多功能金納米棒顆粒成為一種特異性的靶向放療增敏材料。以人TNBC細胞株MDA-MB-231細胞和人乳腺癌細胞株MCF-7細胞為研究對象，利用MTT法及CCK-8法檢測偶聯(lián)雙基因靶點多功能金納米棒顆粒的細胞毒性；透射電子顯微鏡觀察偶聯(lián)雙基因靶點的多功能金納米棒顆粒進入細胞的情況

4、；采用6MV-X線照射偶聯(lián)雙基因靶點的多功能金納米棒顆粒溫育后的腫瘤細胞，克隆形成實驗檢測細胞的放射敏感性改變；流式細胞儀分析細胞凋亡、細胞周期及整合素αvβ3表達水平的改變；Western blot實驗檢測VEGFR的表達水平改變。
　　結(jié)果：
　　1.采用種子誘導生長法合成均一的裸金納米棒顆粒（GNRs），并通過表面包覆二氧化硅（SiO2）及表面聚乙二醇(polyethylene glycol，PEG)修飾，成功構(gòu)建偶聯(lián)

5、RGD及TKI-258雙基因靶點的多功能金納米棒顆粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）。
　　2.透射電子顯微鏡顯示偶聯(lián)雙基因靶點的多功能金納米棒顆粒分散均一，表面硅層厚19.39nm+1.63nm，鏡下可見介孔結(jié)構(gòu)，并可通過細胞內(nèi)吞作用進入MDA-MB-231細胞和MCF-7細胞胞質(zhì)內(nèi)。紫外分光光度計檢測多功能金納米金棒顆粒吸收峰位于515、860 nm處，偶聯(lián)的雙基因靶點抑制劑TKI-258、RGD分別在360

6、、204 nm處有特征性吸收峰。
　　3.偶聯(lián)雙基因靶點的多功能金納米棒顆粒在0-100μg/mL濃度范圍內(nèi)對MDA-MB-231細胞和MCF-7細胞的生物學活性無明顯影響(p>0.05)，細胞毒性評級為I級，IC50值434.63μg/mL。
　　4.流式細胞儀檢測細胞表面整合素αvβ3表達顯示，相對于MCF-7細胞，放射可誘導MDA-MB-231細胞表面整合素αvβ3表達的上調(diào)，而通過聯(lián)合多功能金納米棒顆?？捎行ё钄嗾?/p>

7、素αvβ3位點；Western blot實驗證明偶聯(lián)雙基因靶點的多功能金納米棒顆?？上抡{(diào)細胞表面VEGFR的表達水平。
　　5.克隆形成實驗證明在6MV-X線照射下金納米棒顆粒（GNRs@mSiO2）可提高腫瘤細胞的放射敏感性，且多功能金納米棒顆粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）放療增敏作用更顯著。同時細胞凋亡實驗亦顯示偶聯(lián)雙基因靶點的多功能金納米棒顆粒聯(lián)合照射組的細胞凋亡率明顯高于單純納米聯(lián)合射線組(p<0.0

8、5)；而細胞周期檢測提示多功能金納米棒可使腫瘤細胞阻滯于放療敏感的G2/M期。
　　結(jié)論：
　　1.本課題成功設計并構(gòu)建了偶聯(lián)整合素αvβ3特異性結(jié)合肽 RGD及VEGFR特異性抑制劑TKI-258雙基因靶點的多功能放療增敏金納米棒顆粒（TKI-258-pGNRs@mSiO2-RGD）。
　　2.該多功能金納米棒顆?？捎行ё钄嗄[瘤細胞固有或放射后誘導的整合素αvβ3表達，下調(diào)三陰性乳腺癌細胞MDA-MB-231異常高表