涎腺腺樣囊性癌細胞株ACC-2和ACC-M基因差異表達的初步研究.pdf

1、腫瘤是嚴重威脅人類健康的常見病、多發(fā)病，是醫(yī)學研究的熱點課題，現(xiàn)在大多數(shù)學者認為腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移是多因素、多步驟的發(fā)展過程，常常與某些基因的結(jié)構(gòu)與功能的改變或與某些基因表達調(diào)控異常有關(guān)，但目前所發(fā)現(xiàn)的許多與腫瘤相關(guān)的基因仍不能完全闡明腫瘤的發(fā)生發(fā)展和轉(zhuǎn)移機制。涎腺腺樣囊性癌(adenoidcysticcarcinomaACC)有嗜神經(jīng)侵襲性和易發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的臨床特點，研究ACC轉(zhuǎn)移過程中基因表達的改變，有助于揭示腫瘤的發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移機制

2、。限制性片段差異顯示技術(shù)(restrictionfragmentdifferentialdisplayPCR，RFDD—PCR)是近年來在差異顯示PCR(mfferentialdisplayPCR，DD-PCR)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新技術(shù)，它充分利用了限制性片段長度多態(tài)性分析的可靠性和PCR的高效性，對基因組DNA酶切片段進行選擇性擴增。它可從一對細胞群體或一對基因型各自產(chǎn)生的所有mRNA中有效地鑒定并分離出差異表達的基因，該技術(shù)解決了

3、DD-PCR假陽性率高、重復性差及需要大量篩選引物等不足。已有學者利用該技術(shù)構(gòu)建了乳腺癌的基因表達譜，但運用RFDD—PCR技術(shù)研究ACC基因表達差異則未見相關(guān)報道。 目的：分析比較涎腺腺樣囊性癌高低轉(zhuǎn)移細胞株ACC-2和ACC-M基因表達的差異，為進一步探索該腫瘤的轉(zhuǎn)移調(diào)控機制，及基因診斷、治療、預后判斷提供分子生物學資料。 方法：運用RFDD—PCR技術(shù)構(gòu)建ACC一2和ACC-M的基因表達譜，6％尿素變性聚丙烯酰胺電

4、泳進行表達差異基因的分離和顯示，ImageMaster2D5．0軟件分析計算兩細胞株基因表達譜各基因條帶的灰度值，比較兩細胞株基因表達的差異，再利用http：／／www．qbio-gene．com／display和http：／／www．ncbi．nlm．n訃．gov的數(shù)據(jù)和資料，經(jīng)過生物信息學分析，從兩細胞株差異表達譜尋找表達有明顯差異的基因／EST，并利用RT一PCR對差異表達的基因進行驗證，排除假陽性。 結(jié)果：各基因片段都得