苦參堿對涎腺腺樣囊性癌ACC-M細胞抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的：觀察中藥苦參有效成分苦參堿對涎腺腺樣囊性癌ACC-M細胞生長增殖的抑制作用，初步探討苦參堿對ACC-M細胞抑制作用的機制。 方法：ACC-M細胞由上海第二醫(yī)科大學口腔醫(yī)學院提供，苦參堿由廣州明興制藥廠生產(chǎn)，ACC-M細胞培養(yǎng)于普通RPMI-1640培養(yǎng)基中。實驗組用含不同濃度(0.25mg/ml、0.50mg/ml、0.75mg/ml、1.00mg/ml)苦參堿的培養(yǎng)基進行培養(yǎng)，對照組正常培養(yǎng)，到實驗設計規(guī)定的時間終止培養(yǎng)

2、，進行各項指標檢測。采用MTT法觀察其生長抑制效應；流式細胞技術分析細胞周期變化；RT-PCR法分析苦參堿對ACC-M細胞hTERT基因表達抑制效應；PV-9000兩步法免疫細胞化學染色觀察實驗組與對照組Bcl-2、Bax、PCNA蛋白表達變化；間接免疫熒光聯(lián)合流式細胞技術定量比較Bcl-2、Bax、PCNA實驗組與對照組的表達。統(tǒng)計分析應用SPSS.10.0軟件，采用x2檢驗、方差分析和t檢驗進行統(tǒng)計學處理，取α=0.05為顯著性檢驗

3、水準。 結(jié)論：1.苦參堿能明顯抑制ACC-M細胞的生長增殖，其抑制效應與苦參堿濃度和作用時間成正相關。2.苦參堿能改變ACC-M細胞的周期分布，有明顯的G1期阻滯作用。統(tǒng)計學分析有濃度、時間效應。3.苦參堿可調(diào)控ACC-M細胞凋亡相關基因Bcl-2、Bax的表達，通過改變Bcl-2/Bax的比值誘導細胞凋亡。4.苦參堿能抑制ACC-M細胞的端粒酶活性，其抑制機制是通過下調(diào)hTERT基因表達起作用。5.細胞周期阻滯、端粒酶活性抑制