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1、 本研究應(yīng)用pcDNA3.1(-)CMVe·Egr-1yCDglyTK質(zhì)粒表達(dá)載體,進行鼻咽癌基因-放射治療實驗研究,以進一步明確yCDglyTK融合自殺基因前藥系統(tǒng)對鼻咽癌CNE-2細(xì)胞的殺傷作用及其放射增敏特性。文中采用電轉(zhuǎn)方法將融合自殺基因質(zhì)粒表達(dá)載體轉(zhuǎn)染人鼻咽癌CNE-2細(xì)胞系,用RT-PCR、Western-blot雜交方法鑒定yCDglyTK融合自殺基因在CNE-2細(xì)胞內(nèi)的表達(dá);用MTT法、克隆形成實驗檢測自殺基因前藥系統(tǒng)
2、對yCDglyTK陽性CNE-2細(xì)胞的殺傷效應(yīng)及旁殺效應(yīng);應(yīng)用免疫組化檢測yCDglyTK陽性CNE-2細(xì)胞放射前后自殺基因蛋白表達(dá)水平的變化;用高效液相色譜法測定yCDglyTK陽性CNE-2細(xì)胞放射處理前后前體藥物5-FC向5-FU的轉(zhuǎn)化效率;用MTT法、克隆形成實驗測定自殺基因前藥系統(tǒng)聯(lián)合放射對yCDglyTK陽性CNE-2細(xì)胞的協(xié)同殺傷作用,并用多靶單擊模型擬合數(shù)據(jù),計算在一定濃度前藥存在時該融合自殺基因前藥系統(tǒng)對CNE-2細(xì)胞
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