三氧化二砷和肼苯噠嗪體外逆轉(zhuǎn)ERα表達(dá)作用效果的比較.pdf

1、背景和目的 從20世紀(jì)70年代起，原為乳腺癌低發(fā)區(qū)的亞洲國(guó)家發(fā)病率逐年升高，在我國(guó)特別是在北京、上海等經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)，乳腺癌已有成為威脅女性健康首要惡性腫瘤。在乳腺癌中雌激素受體(ER)常作為一個(gè)重要分子標(biāo)志物用于評(píng)估激素依賴性、預(yù)測(cè)內(nèi)分泌治療的效果。根據(jù)ER表型差異，將乳腺癌分為ER陽(yáng)性乳腺癌和ER陰性乳腺癌。大約2/3乳腺癌患者表達(dá)ER，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)具有雌激素依賴性。臨床上對(duì)于ER陽(yáng)性乳腺癌患者，常采取雌激素撤除的內(nèi)分泌治療，

2、其療效等同于化療。 ER失表達(dá)的機(jī)理不甚清楚，研究發(fā)現(xiàn)，ER陰性乳腺癌ER基因表達(dá)沉默與基因重排、突變、缺失等無(wú)關(guān)，可能與其啟動(dòng)子區(qū)CpG島異常甲基化有關(guān)。目前已被證實(shí)有去甲基化作用的藥物主要有5-雜氮-2-脫氧胞嘧啶，三氧化二砷，肼苯噠嗪等。 選取了兩種國(guó)產(chǎn)藥物。三氧化二砷是一種傳統(tǒng)的抗腫瘤中藥，目前已用于臨床的血液腫瘤的治療。同時(shí)它也具有使去除ER陰性乳腺癌ER基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島異常甲基化作用。肼苯噠嗪是一種抗高血

3、壓藥物，由于其產(chǎn)生的副反應(yīng)較重，臨床上應(yīng)用很少，主要用于妊娠時(shí)的高血壓病。 本實(shí)驗(yàn)探討三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物在最佳有效濃度時(shí)，誘導(dǎo)MDA-MB-231和MDA-MB-435細(xì)胞株雌激素受體重新表達(dá)作用的比較。 材料與方法 1、選用雌激素受體(ER)陰性人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231和MDA-MB-435常規(guī)培養(yǎng)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的MDA-MB-231和MDA-MB-435細(xì)胞調(diào)整細(xì)胞濃度為5×10<

4、'5>/ml，分別換含As<,2>O<,3>的L-15培養(yǎng)液，至As<,2>O<,3>終濃度為2.0μmol/L，換含肼苯噠嗪的L-15培養(yǎng)液，至肼苯噠嗪終濃度為10μmol/L，連續(xù)培養(yǎng)72h。以不加藥同期培養(yǎng)的MDA-MB-231和MDA-MB-435細(xì)胞作為陰性對(duì)照。 2、采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)兩種藥物處理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435細(xì)胞ERa基因mRNA表達(dá)情況。并用imagcj軟件分析兩種藥物去甲基化作用的

5、強(qiáng)弱。 3、采用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)經(jīng)兩種藥物處理后的MDA-MB-231和MDA-MB-435細(xì)胞ERa蛋白的表達(dá)情況。 4、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)經(jīng)SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理，采用方差分析，以a=0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 結(jié)果 1、免疫組化法檢測(cè)經(jīng)三氧化二砷和肼苯噠嗪處理的MDA-MB-231細(xì)胞漿上均可見ERa蛋白的表達(dá)，陽(yáng)性率(％)：三氧化二砷為52.04±2.38，肼苯噠嗪為51.07±1.43。兩組數(shù)據(jù)

6、比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)。MDA-MB-435細(xì)胞漿上均可見ERa蛋白的表達(dá)，陽(yáng)性率(％)：三氧化二砷為55.15±6.56，肼苯噠嗪為54.11±5.36。兩組數(shù)據(jù)比較差別無(wú)統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)。 2、MDA-MB-231、MDA-MB-435細(xì)胞株雌激素受體在三氧化二砷和肼苯噠嗪誘導(dǎo)作用中無(wú)明顯差異(P>0.05)。 3、RT-PCR法檢測(cè)經(jīng)三氧化二砷和肼苯噠嗪處理的MDA-MB-231和MDA-MB-

7、435細(xì)胞均能擴(kuò)增出ERa基因，結(jié)果用imagej軟件進(jìn)行分析顯示兩種藥物的去甲基化作用沒有明顯的差異。 結(jié)論 1、三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物在最佳有效濃度時(shí)，誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞株雌激素受體重新表達(dá)作用無(wú)明顯差異。 2、三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物在最佳有效濃度時(shí)，誘導(dǎo)MDA-MB-435細(xì)胞株雌激素受體重新表達(dá)作用無(wú)明顯差異。 3、三氧化二砷和肼苯噠嗪兩種去甲基化藥物作用效果