三氧化二砷抑制子宮內(nèi)膜癌生長的體內(nèi)和體外實驗研究.pdf

1、目的：子宮內(nèi)膜癌是三大婦科惡性腫瘤之一，晚期癌或復發(fā)癌的預后很差，因此這部分病人的治療是一個臨床難題，臨床迫切需要作用強且副作用小的新型抗癌藥物。三氧化二砷（AS2O3）是一種新型的抗癌藥物，在臨床上已經(jīng)成功用于治療急性早幼粒細胞白血?。ˋPL）的治療，且對某些實體瘤體內(nèi)和體外實驗也證實其有良好的化療效果，但AS2O3對子宮內(nèi)膜癌的作用國內(nèi)外鮮為報道。本研究通過體內(nèi)和體外實驗探討AS2O3對人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A細胞生長的抑制作用及

2、作用機制，并全面評價其毒副作用，為臨床應用AS2O3治療子宮內(nèi)膜癌提供基礎。
　　 方法：
　　 1.用四氮唑鹽法（MTT法）檢測細胞增殖活性，比較AS2O3和黃體酮、安宮黃體酮、順鉑（CDDP）對HEC-1-A細胞的抑制作用。
　　 2.應用流式細胞儀檢測細胞周期
　　 HEC-1-A細胞經(jīng)5μmol/L AS2O3作用48 h后，蛋白酶消化，收集1×106個細胞，應用流式細胞儀檢測細胞的DNA含量，分

3、析細胞周期[4]。計算機程序擬合分析DNA分布直方圖，以百分數(shù)表示各期細胞（G0/G1、S、G2/M）所占比率。在DNA分布直方圖的G0/G1峰前出現(xiàn)一個亞峰，為細胞凋亡峰。
　　 3.DNA電泳檢測細胞凋亡
　　 HEC-1-A細胞經(jīng)5，10μmol/L AS2O3作用48 h后，收集5～10×106個細胞，運用苯酚-氯仿-無水酒精方法提取DNA[5]，1.2％瓊脂膠電泳后，于紫外線下觀察DNA帶，細胞凋亡呈典型的梯狀

4、DNA。
　　 4.建立裸鼠荷人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A細胞移植瘤動物模型，隨機分為實驗組即AS2O3低（4 mg·kg-1·d-1）、中（6mg·kg-1·d-1）、高（8 mg·kg-1·d-1）劑量組、陽性對照順鉑（CDDP）組（3 mg·kg-1·d-1）及陰性對照生理鹽水（NS）組，腹腔連續(xù)給藥14 d，計算瘤體積和瘤重量抑制率，觀察用藥前后裸鼠體重改變。
　　 5.毒副作用分析：于停藥后第2日稱體重，“摘眼球

5、”法處死裸鼠，收集血液用于血常規(guī)檢測，血清用于肝腎功能檢測；檢測腫瘤組織以及心、肝、脾、肺、腎和子宮的濕重，各臟器制成蠟塊用于病理檢測。
　　 6.運用統(tǒng)計軟件SPSS11.5對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.體外實驗結(jié)果顯示：AS2O3和CDDP濃度在1～20μmol/L時可顯著抑制細胞生長，且AS2O3>CDDP。AS2O3（5μmol/L）作用后導致細胞凋亡，S和G2/M細胞周期阻滯。
　

6、　 2.體內(nèi)實驗結(jié)果顯示：低、中、高劑量AS2O3組和CDDP組腫瘤體積抑制率分別為：50.97％、75.58％、56.92％、52.23％；腫瘤重量抑制率分別為：10.15％、29.33％、16.67％、14.69％，與生理鹽水組比較差異均有顯著性（P<0.05），可見中高劑量的AS2O3對移植瘤的抑制作用強于CDDP。
　　 3.裸鼠一般情況觀察：給藥后不久CDDP組裸鼠活動明顯減少、精神不振、食量減少，飲水量增加，日漸消

7、瘦，出現(xiàn)明顯惡病質(zhì)表現(xiàn)，在處死前一天該組裸鼠死亡一只。而AS2O3各組及陰性對照組裸鼠精神狀態(tài)及活動均良好，AS2O3各組裸鼠飲食增加。
　　 4.裸鼠體重變化情況：用藥前后AS2O3各組體重變化不明顯，用藥后CDDP組裸鼠體重平均明顯下降（3.74±2.36）g，與AS2O3各組及陰性對照組之間比較差異有顯著性（P<0.05）。
　　 5.血常規(guī)檢測結(jié)果顯示：AS2O3和CDDP對血紅蛋白含量無明顯影響，與陰性對照組比

8、較，差異無顯著性（P>0.05）；AS2O3各劑量組白細胞和血小板數(shù)目與陰性對照組相比數(shù)量降低，差異有顯著性（P<0.05）。CDDP組裸鼠的白細胞、紅細胞、血小板數(shù)量及血細胞比容均較陰性對照組降低，差異有顯著性（P<0.05）。CDDP組與AS2O3各組比較，在紅細胞、血小板數(shù)目下降方面差異有顯著性（P<0.05），說明CDDP對血象的影響較AS2O3明顯。
　　 6.肝腎功能檢測結(jié)果顯示：AS2O3對肝腎功能較陰性對照組比較

9、，無顯著性差異（P>0.05），說明AS2O3對肝腎功能無影響。而CDDP組谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及、總膽紅素、膽堿酯酶等各肝功能指標的數(shù)值均有不同程度的升高，AST/ALT比值下降較陰性對照組比較，有顯著性差異（P<0.05），說明CDDP對肝功能有不同程度的影響，而且與AS2O3各組比較，差異有顯著性（P<0.05），說明CDDP對肝功能的影響較AS2O3明顯；CDDP組尿素氮有不同程度的升高，血糖值下降，較陰性對照組比較，有顯著性

10、差異（P<0.05），說明CDDP對腎功能有影響，而且與AS2O3各組比較，差異有顯著性（P<0.05），說明CDDP對腎功能的影響較AS2O3明顯。
　　 7.主要臟器濕重比較及病理學觀察：AS2O3對主要臟器濕重無明顯影響，較陰性對照組相比差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），而CDDP組的心、肝、脾、腎平均濕重較AS2O3各組及陰性對照組輕，比較差異有顯著性（P<0.05），提示CDDP對各臟器影響較AS2O3明顯。然而HE染

11、色光鏡下觀察，各組裸鼠臟器均未發(fā)現(xiàn)明顯病灶。
　　 8.免疫組化學法檢測移植瘤細胞中PCNA和p27蛋白表達情況：陰性對照組PCNA染色為強陽性，AS2O3中劑量組多為陰性或者弱陽性；陰性對照組p27染色均為陰性，AS2O3中劑量組多為陽性。
　　 結(jié)論：
　　 1.AS2O3體外和體內(nèi)均具有很強的抑制人子宮內(nèi)膜癌HEC-1-A細胞生長的作用。
　　 2.AS2O3治療濃度的抗腫瘤作用并不是越高越好，而應

12、該采取最適劑量，實驗中以6 mg·kg-1·d-1的劑量最為合適，其抑瘤效果明顯優(yōu)于低、高劑量AS2O3以及CDDP。
　　 3.AS2O3通過誘導細胞凋亡和導致S、G2/M期細胞周期阻滯而抑制HEC-1-A細胞生長。體內(nèi)實驗進一步表明，AS2O3可能通過下調(diào)核增殖抗原PCNA的表達、上調(diào)抑癌基因p27的表達，而干擾細胞周期，抑制腫瘤的生長。
　　 4.治療劑量的AS2O3對子宮內(nèi)膜癌 HEC-1-A細胞的抑制作用強于C