RNA干擾聯(lián)合氧化苦參堿抑制VEGF治療子宮內(nèi)膜癌的實驗研究.pdf

1、目的：觀察RNA干擾聯(lián)合氧化苦參堿（Oxymatrine，Oxy）對子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞株血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的基因表達及細胞增殖的影響。 方法：針對VEGF基因RNA干擾的有效作用位點，利用pRNAT-CMV3.2-Neo載體，設計并構建能在腫瘤細胞內(nèi)表達siRNA的質粒pRNAT-CMV3.2-Neo-VEGF，以及陰性對照表達質粒pRN

2、AT-CMV3.2-Neo-neg；將構建的表達質粒轉染子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細胞株，并加入中藥Oxy，采用RT-PCR檢測VEGF mRNA表達的變化，Western印跡法檢測VEGF蛋白的表達，MTT比色法檢測細胞的增殖，流式細胞儀檢測細胞凋亡及細胞周期，顯微鏡下進行細胞形態(tài)學觀察，人工重組基底膜侵襲小室（Transwell）觀察細胞的侵襲能力。 結果：構建的表達質粒成功轉染Ishikawa細胞株，RNA干擾聯(lián)合Oxy可

3、下調(diào)細胞中VEGFmRNA及其蛋白的表達，明顯抑制Ishikawa細胞的增殖，細胞周期發(fā)生改變，G1期細胞比例增加，S期細胞則減少，熒光顯微鏡可見細胞凋亡形態(tài)學變化，Ishikawa細胞侵襲基底膜的能力明顯被抑制。 結論：RNA干擾聯(lián)合Oxy可抑制Ishikawa細胞增殖，誘導Ishikawa細胞凋亡及分化，降低腫瘤細胞的侵襲能力；其作用機制可能與成功下調(diào)VEGF基因的表達有關。RNA干擾聯(lián)合Oxy效果強于單用中藥治療或單用RN