聯(lián)合應(yīng)用靶向VEGF-A、Ang-2的shRNA抑制子宮內(nèi)膜癌生長的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn).pdf

1、目的子宮內(nèi)膜癌發(fā)病率呈逐年增高趨勢，嚴(yán)重影響女性生命健康，因此探討子宮內(nèi)膜癌治療的新措施具有重要的意義。目前大量研究表明在子宮內(nèi)膜癌腫瘤內(nèi)VEGF-A、Ang-2等血管生成因子表達(dá)升高，且與腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移等有密切的關(guān)系。本研究構(gòu)建靶向VEGF-A和Ang-2的shRNA，采用分子生物學(xué)技術(shù)驗(yàn)證其在子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株Ishikawa細(xì)胞中的治療有效性，并建立子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，進(jìn)一步證實(shí)了聯(lián)合應(yīng)用靶向VEGF

2、-A和Ang-2的shRNA顯著抑制子宮內(nèi)膜癌移植瘤的生長，為子宮內(nèi)膜癌的靶向抗血管生成治療提供依據(jù)。
　　方法體外培養(yǎng)子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞株，利用脂質(zhì)體介導(dǎo)shRNA VEGF-A和shRNA Ang-2轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，以無義隨機(jī)序列構(gòu)建的陰性質(zhì)粒組作為對照，實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)檢測VEGF-A、Ang-2 mRNA表達(dá)水平的變化；Western blot技術(shù)檢測VEGF-A、Ang-2蛋白質(zhì)表達(dá)的變化；MTT法檢測VEGF

3、-A、Ang-2下調(diào)后對細(xì)胞增殖能力的影響；Annexin V-PE雙染后流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡情況；Transwell腫瘤侵襲實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞侵襲能力的變化。建立子宮內(nèi)膜癌Ishikawa細(xì)胞裸鼠皮下移植瘤模型，給予shRNAVEGF-A聯(lián)合shRNA Ang-2治療，Western blot技術(shù)檢測瘤體中VEGF-A、Ang-2蛋白質(zhì)表達(dá)的變化，免疫組化檢測微血管密度，各組織器官HE染色觀察毒副作用及腫瘤轉(zhuǎn)移情況。
　　結(jié)果在體

4、外實(shí)驗(yàn)中，與空白對照組和陰性質(zhì)粒組相比，VEGF-A干擾組、Ang-2干擾組、聯(lián)合干擾組都能從mRNA水平、蛋白水平下調(diào)Ishikawa細(xì)胞中靶基因的表達(dá)。各干擾組都能有效地抑制Ishikawa細(xì)胞生長增殖能力和侵襲能力，其中聯(lián)合干擾組抑制效果更顯著，各組對細(xì)胞周期和凋亡無明顯影響。
　　在體內(nèi)試驗(yàn)中，與空白對照組和陰性質(zhì)粒組相比，VEGF-A干擾組、Ang-2干擾組、聯(lián)合干擾組下調(diào)裸鼠皮下移植瘤內(nèi)靶基因的蛋白表達(dá)，各干擾組移植瘤