

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文檔簡介
1、目的:化療是白血病治療的基本手段,能夠抑制白血病的進展,提高患者的生存率和生活質(zhì)量。但大多數(shù)腫瘤細(xì)胞在化療之后,對抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性,導(dǎo)致化療失敗或腫瘤復(fù)發(fā)。多藥耐藥(MDR)指腫瘤細(xì)胞對一種抗腫瘤藥物產(chǎn)生耐藥性的同時,對結(jié)構(gòu)和作用機制完全不同的其他抗腫瘤藥物產(chǎn)生交叉耐藥性的現(xiàn)象[1]。MDR是導(dǎo)致腫瘤化療失敗或腫瘤復(fù)發(fā)的重要原因之一,目前克服多藥耐藥仍然是一個較大的挑戰(zhàn)。多數(shù)情況下應(yīng)用一種逆轉(zhuǎn)劑效果欠佳,應(yīng)用劑量大時增強毒副作用,限
2、制了臨床的應(yīng)用。目前已有研究表明[14,15,21,22]環(huán)孢素A和三氧化二砷單獨應(yīng)用對多藥耐藥有一定的逆轉(zhuǎn)作用,但兩藥聯(lián)合應(yīng)用未見報道。本研究采用WST-1法測定環(huán)孢素A和三氧化二砷對具有多藥耐藥表型的人白血病細(xì)胞株K562/ADM細(xì)胞的非細(xì)胞毒性劑量,聯(lián)合兩藥作用于K562/ADM細(xì)胞,觀察逆轉(zhuǎn)耐藥的療效,并應(yīng)用RT-PCR法檢測MDR1mRNA、hMLH1mRNA的表達量,及免疫組化法檢測P-gp、hMLH1蛋白的表達量,探討其逆
3、轉(zhuǎn)機制,為其以后臨床應(yīng)用提供相關(guān)的實驗室數(shù)據(jù),同時為難治、復(fù)發(fā)腫瘤的治療提供新的治療思路。
方法:
1.水溶性四唑鹽光吸收(WST-1)法檢測環(huán)孢素A和(或)三氧化二砷對K562細(xì)胞、K562/ADM細(xì)胞的毒性及其作用后的逆轉(zhuǎn)耐藥倍數(shù)。
2.RT-PCR法檢測各組MDR1mRNA、hMLH1mRNA的表達:(1)K562細(xì)胞組,(2)K562/ADM細(xì)胞組,(3)非細(xì)胞毒性劑量環(huán)孢素A及三氧化二
4、砷聯(lián)合作用于K562/ADM細(xì)胞組(K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量)。
3.免疫組化法檢測各組P-gp、hMLH1蛋白的表達:(1)K562細(xì)胞組,(2)K562/ADM細(xì)胞組,(3)非細(xì)胞毒性劑量環(huán)孢素A及三氧化二砷聯(lián)合作用于K562/ADM細(xì)胞組(K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量)。
4.統(tǒng)計分析:所得結(jié)果應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計學(xué)軟件處理
5、,統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示。兩組均數(shù)的比較采用t檢驗分析,多樣本均數(shù)的比較在方差齊性檢驗后采用單因素方差分析。以α=0.05為檢驗水準(zhǔn),P<0.05為差異有顯著性。
結(jié)果:
1.WST-1結(jié)果顯示:(1)ADM IC50值在K562細(xì)胞、K562/ADM細(xì)胞分別是1.06±0.019μg/ml、32.47±0.012μg/ml,統(tǒng)計學(xué)分析后有顯著性差異(P<0.05),K562/ADM細(xì)胞的耐藥
6、倍數(shù)為30.63。CSA IC50值在K562細(xì)胞、K562/ADM細(xì)胞分別是0.357±0.018μg/ml、0.372±0.016μg/ml,統(tǒng)計學(xué)分析后無顯著性差異(P>0.05),K562/ADM細(xì)胞的耐藥倍數(shù)為1.04。As2O3IC50值在K562細(xì)胞、K562/ADM細(xì)胞分別是0.733±0.142μg/ml、0.923±0.232μg/ml,統(tǒng)計學(xué)分析后無顯著性差異(P>0.05),K562/ADM細(xì)胞的耐藥倍數(shù)為1.2
7、6。(2)非細(xì)胞毒性劑量的CSA(0.0005μg/ml)和As2O3(0.002μg/ml)單獨應(yīng)用,ADM對K562/ADM細(xì)胞的IC50分別降至20.52±2.34μg/ml和21.62±1.81μg/ml,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)分別為1.58倍和1.50倍。非細(xì)胞毒性劑量的CSA與As2O3聯(lián)合作用于K562/ADM細(xì)胞,IC50降至9.63±1.57μg/ml,逆轉(zhuǎn)倍數(shù)為3.37倍。
2.RT-PCR擴增結(jié)果顯示:(1)K56
8、2細(xì)胞組與K562/ADM細(xì)胞組比較,MDR-1mRNA的表達減少,差異有顯著性(P<0.05),K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量組與K562/ADM細(xì)胞組比較,MDR-1 mRNA的表達下調(diào),差異有顯著性(P<0.05),K562細(xì)胞組與K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量組比較差異無顯著性(P>0.05)。(2)K562細(xì)胞組與K562/ADM細(xì)胞組比較,hMLH1 mRN
9、A的表達增多,差異有顯著性(P<0.05),K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量組與K562/ADM細(xì)胞組比較,hMLH1 mRNA的表達上調(diào),差異有顯著性(P<0.05),K562細(xì)胞組與K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量組比較差異無顯著性(P<0.05)。
3.免疫組化法染色法檢測結(jié)果顯示:1)K562細(xì)胞組與K562/ADM細(xì)胞組比較,P-gp表達減少,差異有
10、顯著性(P<0.05),K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量組與K562/ADM細(xì)胞組比較,P-gp表達下調(diào),差異有顯著性(P<0.05),K562細(xì)胞組與K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量組比較差異無顯著性(P>0.05)。(2)K562細(xì)胞組與K562/ADM細(xì)胞組比較,hMLH1蛋白表達增多,差異有顯著性(P<0.05),K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非
11、細(xì)胞毒性劑量組與K562/ADM細(xì)胞組比較,hMLH1蛋白表達上調(diào),差異有顯著性(P<0.05),K562細(xì)胞組與K562/ADM+CSA非細(xì)胞毒性劑量+As2O3非細(xì)胞毒性劑量組比較差異無顯著性(P>0.05)。
結(jié)論:
1.環(huán)孢素A和三氧化二砷能抑制K562、K562/ADM細(xì)胞的增殖,K562/ADM細(xì)胞對環(huán)孢素A和三氧化二砷不具有耐藥性。
2.非細(xì)胞毒性劑量的環(huán)孢素A和三氧化二砷聯(lián)合作用
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