羥氯喹抑制自噬活性逆轉白血病K562-ADM細胞耐藥性.pdf

1、分類號：分類號：Q5密級：密級：公開公開研究生學位論文論文題目（中文）論文題目（中文）羥氯喹抑制自噬活性逆轉白血病K562ADM細胞耐藥性論文題目（外文）論文題目（外文）HydroxychloquinereversesdrugresistanceofleukemicK562ADMcellsbyinhibitionofautophagy研究生姓名研究生姓名王菲菲學科、專業(yè)學科、專業(yè)生物學生物化學與分子生物學研究方向研究方向腫瘤細胞分子生物

2、學學位級別學位級別碩士導師姓名、職稱導師姓名、職稱魏虎來教授論文工作論文工作起止年月起止年月2013年9月至2016年3月論文提交日期論文提交日期2016年3月論文答辯日期論文答辯日期2016年5月學位授予日期學位授予日期校址：甘肅省蘭州市校址：甘肅省蘭州市I羥氯喹羥氯喹抑制自噬抑制自噬活性逆轉活性逆轉白血病白血病K562ADMK562ADM細胞細胞耐藥性耐藥性中文摘要中文摘要背景背景自噬是存在于真核細胞的依賴溶酶體降解來清除衰老及損傷

3、細胞器和生物大分子物質，進而實現(xiàn)再利用的生物學過程。自噬與腫瘤的關系非常密切，腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中自噬活性具有兩面性：一方面機體可利用自噬作用殺傷或清除腫瘤細胞，另一方面腫瘤細胞也可依賴自噬作用獲取相對較好的生存環(huán)境。當腫瘤細胞遭受抗癌藥物和輻射等壓力刺激時，腫瘤細胞可通過自噬來對抗藥物和射線的細胞毒性，增強腫瘤細胞的耐受性。有關自噬活性與腫瘤細胞耐藥性的關系研究有望通過調控自噬活性來干預腫瘤耐藥性問題。目的目的本課題擬通過比較研究白血

4、病敏感細胞和耐藥性細胞的基礎性及誘發(fā)性自噬活性的差異，探討能否通過采用自噬抑制劑羥氯喹抑制細胞自噬活性來克服白血病細胞的藥物耐受性，并探討自噬與白血病細胞耐藥性的相關性。方法方法以白血病藥物敏感K562細胞和耐藥K562ADM細胞為模型，檢測細胞基礎自噬活性，營養(yǎng)剝奪（饑餓）和阿霉素（ADM）處理誘導細胞自噬；羥氯喹預處理后檢測細胞對ADM的敏感性。采用透射電鏡和單丹磺酰尸胺（MDC）熒光染色觀察細胞自噬形態(tài)學；采用吖啶橙（AO）溴乙錠

5、（EB）雙染觀察細胞凋亡形態(tài)學；MTT法檢測細胞增殖活性；實時熒光定量RTPCR法檢測beclin1、bax、bcl2和mdr1基因mRNA的相對表達量；流式細胞術檢測凋亡相關蛋白Bax、Bcl2和耐藥蛋白Pgp的表達以及Caspase3活性；Westernblot檢測LC3III、Beclin1、Bax、Bcl2、Caspase3、Pgp的表達以及P62的水平。結果K562ADM細胞對阿霉素具有很高的耐受性，12h、24h、48h的半