上調(diào)PTEN基因表達對K562-ADM白血病細胞化療增敏的實驗研究.pdf

1、目的：探討上調(diào)人第10號染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(phosphatase and tensin homologue deleted on chromosome10,PTEN)表達對白血病耐藥細胞化療增敏的機制。
　　 方法：將PTEN真核表達質(zhì)粒導(dǎo)入K562/ADM（阿霉素）細胞中，采用Western blot和RT-PCR方法檢測PTEN基因在轉(zhuǎn)染前后的表達;MTT法檢測ADM對轉(zhuǎn)染前后K562/ADM細胞存活率的

2、影響;應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測細胞凋亡百分率;采用重組人胱天蛋白酶-3(caspase-3)活性定量試劑盒分析caspase-3的活性;Western blot檢測自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3(LC3)-Ⅰ/Ⅱ、自噬相關(guān)蛋白Beclin1、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化40S核糖體蛋白6s激酶(p-p70S6K)的表達;單丹磺酰戊二胺(MDC)染色和透視電鏡觀察自噬泡的情況。
　　 結(jié)果：①與未經(jīng)處理和轉(zhuǎn)染空載體的K562/ADM細

3、胞相比，轉(zhuǎn)染PTEN基因的K562/ADM細胞組PTEN mRNA和蛋白水平均增高。②轉(zhuǎn)染PTEN基因使K562/ADM細胞對ADM的藥物敏感性增強。與轉(zhuǎn)染空載體組比較，其細胞存活率從(94.07±2.61)％降低到(53.83±4.23)％，細胞凋亡率從(11.89±1.69)％增加到(43.69±2.30)％，P值均＜0.05;而轉(zhuǎn)染空載體組與未轉(zhuǎn)染組的細胞存活率[（95.26±3.42）％vs（94.07±2.61）％]、細胞凋亡

4、率[（7.64±3.62）％vs（11.89±1.69）％]差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。經(jīng)caspase-3抑制劑(Z-DEVE-FMK)預(yù)處理后，轉(zhuǎn)染組細胞存活率[（74.15±3.13）％]較未轉(zhuǎn)染組[（97.46±1.31）％]及空載體組[（95.08±3.51）％]亦明顯降低(P＜0.05)，但高于未加Z-DEVD-FMK干預(yù)的細胞存活率[（53.83±4.23）％](P＜0.05)。③ADM處理細胞12h和24 h后，轉(zhuǎn)

5、染PTEN基因的K562/ADM細胞casepase-3活性[（2.27±0.13）和（3.15±0.08）]均明顯高于轉(zhuǎn)染空載體組[（1.19±0.14）和（1.48±0.06）]，P值均＜0.05。④與轉(zhuǎn)染空載體組比較，轉(zhuǎn)染PTEN基因的K562/ADM細胞LC3-Ⅱ和Beclin1的蛋白表達水平分別增加了83％和18％，同時p-Akt和p-p70S6K的蛋白表達水平分別降低了96％和87％;⑤增加PTEN的表達，細胞內(nèi)自噬泡較轉(zhuǎn)染