三羥異黃酮誘導(dǎo)K562和K562-ADM細(xì)胞的凋亡作用.pdf

1、目的：研究三羥異黃酮(Genistein)對人紅白血病細(xì)胞系K562與其多藥耐藥細(xì)胞系K562/ADM的生長抑制、誘導(dǎo)凋亡作用及探討其可能的作用機(jī)理。 方法：1、不同濃度的三羥異黃酮處理K562細(xì)胞與K562/ADM細(xì)胞后，用噻唑藍(lán)(MTT)比色法檢測細(xì)胞生長增殖作用。 2、Wright-Gimesa法觀察三羥異黃酮對K562細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化。 3、瓊脂糖凝膠電泳觀察三羥異黃酮對K562細(xì)胞的DNA電泳帶。

2、 4、流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期。 5、流式細(xì)胞術(shù)檢測Bcl-2蛋白的表達(dá)陽性率和平均熒光強(qiáng)度。 6、免疫細(xì)胞化學(xué)ABC法分析Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：1、三羥異黃酮對K562細(xì)胞及K562/ADM細(xì)胞均有很強(qiáng)的生長抑制作用。三羥異黃酮作用24h、48h、72h時(shí)對K562細(xì)胞及K562/ADM細(xì)胞的生長抑制率與濃度。呈正相關(guān)；三羥異黃酮對K562/ADM細(xì)胞的耐藥倍數(shù)為1.67倍； 2、三羥異

3、黃酮作用K562細(xì)胞48h，隨著濃度增加，凋亡細(xì)胞百分率對應(yīng)增加，細(xì)胞凋亡率與濃度有依賴性，細(xì)胞周期分布檢測顯示：可見亞G1期細(xì)胞增多，G1期、S期細(xì)胞減少，G2/M期細(xì)胞增多，提示細(xì)胞發(fā)生G2/M期阻滯。而三羥異黃酮作用K562/ADM細(xì)胞，細(xì)胞組間凋亡率沒有K562細(xì)胞變化明顯，但細(xì)胞也發(fā)生明顯的G2/M期阻滯； 3、不同濃度三羥異黃酮作用K562細(xì)胞48h，Bcl-2蛋白陽性表達(dá)率和平均熒光強(qiáng)度隨濃度增加逐漸下降。但K56

4、2/ADM細(xì)胞的Bcl-2蛋白陽性表達(dá)率和平均熒光強(qiáng)度均無明顯變化； 4、不同濃度三羥異黃酮對K562細(xì)胞的bax蛋白陽性表達(dá)率100％，明顯高于對照組，組間比較有顯著性差異(p＜0.05)；而Bcl-2蛋白在實(shí)驗(yàn)組同對照組細(xì)胞比較陽性表達(dá)無明顯變化。在K562/ADM細(xì)胞中，Bcl-2蛋白在實(shí)驗(yàn)組和對照組細(xì)胞中均強(qiáng)表達(dá)，但Bax的表達(dá)無明顯變化。 5、光鏡下可見隨著濃度的增加部分K562細(xì)胞體積皺縮，細(xì)胞表面凸起小膜泡

5、，呈桑椹狀，染色質(zhì)集中到細(xì)胞邊緣，細(xì)胞核固縮，出現(xiàn)核碎裂等凋亡改變。對照組細(xì)胞形態(tài)無明顯改變。 6、50-1001μmol/L三羥異黃酮作用K562細(xì)胞48h后，DNA瓊脂糖凝膠電泳顯示較明顯的凋亡梯形條帶。 結(jié)論：1、三羥異黃酮可明顯抑制K562及K562/ADM細(xì)胞生長增殖； 2、三羥異黃酮對K562/ADM細(xì)胞的耐藥倍數(shù)為1.67倍，說明K562/ADM細(xì)胞株是多藥耐藥表型的細(xì)胞系，提示K562細(xì)胞對三羥異

6、黃酮的反應(yīng)比K562/ADM細(xì)胞敏感； 3、三羥異黃酮可干擾細(xì)胞周期，使K562細(xì)胞和K562/ADM細(xì)胞阻滯在G2/M期； 4、同一濃度下三羥異黃酮誘導(dǎo)K562/ADM細(xì)胞凋亡率明顯低于K562細(xì)胞，說明三羥異黃酮更易誘導(dǎo)K562細(xì)胞調(diào)亡，K562/ADM細(xì)胞對三羥異黃酮同樣存在耐藥現(xiàn)象； 5、三羥異黃酮誘導(dǎo)K562細(xì)胞Bax蛋白高表達(dá)和Bcl-2蛋白表達(dá)下調(diào)可能是三羥異黃酮誘導(dǎo)K562細(xì)胞凋亡的機(jī)制之一。K5