S100A8對(duì)白血病細(xì)胞自噬和耐藥性影響的研究.pdf

1、目的:探討人S100鈣結(jié)合蛋白A8(human S100 calcium bindingprotein A8，S100A8)對(duì)自噬的影響和白血病細(xì)胞耐藥性影響的研究。
　　方法:本研究首先收集近3年本院診斷的急性白血病患兒的骨髓單個(gè)核細(xì)胞(Bone Marrow Mononuclear Cells，BMMCs)及血漿標(biāo)本，通過酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme-linked immuno sorbentassay，ELISA)和蛋白印

2、跡法(Western Blotting，WB)檢測(cè)S100A8蛋白的表達(dá)情況;同時(shí)選用不同的白血病細(xì)胞株，噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)其半數(shù)抑制濃度(50％ concentration of inhibition，IC50)，得出不同細(xì)胞株對(duì)化療藥物的耐藥程度，采用Realtime PCR、WesternBlotting方法檢測(cè)S100A8在不同白血病細(xì)胞株的表達(dá)情況，探討S100A8與白血病細(xì)胞化療耐藥性的關(guān)系;同時(shí)通過基因轉(zhuǎn)染、RNAi技

3、術(shù)、Western Blotting、Realtime PCR、透射電鏡及MTT方法等方法檢測(cè)S100A8是否通過調(diào)節(jié)白血病細(xì)胞的自噬影響其化療耐藥性。
　　結(jié)果:
　?、侔l(fā)現(xiàn)初治/復(fù)發(fā)組明顯高于完全緩解組、正常對(duì)照組（*P＜0.05）。
　?、诨熕幬锟墒拱籽〖?xì)胞的S100A8表達(dá)增高(n=3，P＜0.05)。
　?、跾100A8在白血病耐藥株(HL-60/ADR、K562/AO2)中的表達(dá)較非耐藥細(xì)胞株（K

4、562、HL-60和Jurkat）顯著增高(n=3，P＜0.05)。
　?、芤种芐100A8表達(dá)，可以使化療藥物處理后的白血病細(xì)胞存活率下降，使細(xì)胞凋亡率增加;同時(shí)，抑制 S100A8后P62表達(dá)上調(diào)而LC3-Ⅰ/Ⅱ表達(dá)下調(diào)，透射電鏡進(jìn)一步說明自噬受到抑制;
　　⑤上調(diào)S100A8表達(dá)能促進(jìn)自噬泡的形成，增加LC3-Ⅱ、Beclin1表達(dá)及降低P62的表達(dá)。此外，沉默K562細(xì)胞中PI3KC3、Beclin1，Atg7的表達(dá)