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文檔簡介
1、研究背景:白血病是一類造血干細胞的惡性克隆性疾病,因白血病細胞自我更新增強、增殖失控、分化障礙、凋亡受阻,而停滯在細胞發(fā)育的不同階段。白血病的治療主要以化療為主,但是化療過程中往往出現(xiàn)癌細胞對藥物的耐藥現(xiàn)象導(dǎo)致治療失敗、腫瘤復(fù)發(fā)。MicroRNA(miR)是一種保守進化的小RNA分子,在一些關(guān)鍵的生物過程中發(fā)揮著重要的作用,如發(fā)育時序、干細胞分化、信號傳導(dǎo)、疾病和腫瘤等。目前有研究顯示microRNA30c(miR-30c)在多種耐藥腫
2、瘤中呈低表達狀態(tài),包括紫杉醇、順鉑耐藥的卵巢癌細胞株和伊馬替尼耐藥的慢性粒細胞白血病,而miR-30c是否也參與到對阿霉素耐藥的白血病中尚未有文獻報道。所以本課題主要研究miR-30c與白血病阿霉素耐藥的關(guān)系,通過分析白血病細胞株和臨床白血病患者骨髓標(biāo)本中miR-30c及其靶基因FANCF的表達及其相互關(guān)聯(lián)情況,來研究miR-30c是否參與對白血病阿霉素耐藥性的調(diào)節(jié)及其分子機制。
目的:探討miR-30c與白血病阿霉素耐藥的關(guān)
3、系及機制。
方法:使用MTT法檢測白血病細胞K562、阿霉素耐藥株K562/R和FANCF沉默的K562/R-SH細胞的耐藥性。實時熒光定量PCR方法檢測K562、K562/R、K562/R-SH細胞和臨床白血病患者骨髓標(biāo)本中miR-30c和靶基因FANCF mRNA的表達。Western Blot檢測K562、K562/R和K562/R-SH細胞中FANCF蛋白的表達。彗星實驗檢測K562、K562/R和K562/R-SH細
4、胞中的DNA損傷。
結(jié)果:MTT結(jié)果顯示K562/R細胞對阿霉素的耐藥性為K562細胞的26.58倍,F(xiàn)ANCF基因沉默后K562/R細胞的耐藥性下降44.70%。miR-30c在K562/R細胞中的表達水平明顯低于K562細胞。FANCF mRNA和蛋白在K562/R細胞中的表達水平明顯高于K562細胞。FANCF基因沉默后K562/R細胞中miR-30c表達升高。彗星實驗結(jié)果提示40μM阿霉素處理后K562/R細胞中DNA
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