bcl-2基因主要斷裂點區(qū)mbr在基因表達調控中的作用.pdf

1、第一部分利用熒光素酶報告基因系統(tǒng)研究bcl-2mbr的調控功能 14號和18號染色體的易位即t(14；18)(q32；q21)是濾泡性淋巴瘤發(fā)生的關鍵步驟。位于bcl-2基因3'端非翻譯區(qū)(3，-UTR)的bcl-2基因主要斷裂點區(qū)(mbr)是發(fā)生該易位的主要位點。bcl-2mbr在一定的條件下可以形成穩(wěn)定的“三鏈”DNA(triplexDNA)結構，而“三鏈”DNA結構在DNA復制和基因轉錄活性的調控中具有重要的作用。bcl-

2、2mbr是核基質附著區(qū)(MAR)，其3'端的AT豐富區(qū)是核基質蛋白SATB1結合所必須。已知SATB1還是重要的轉錄因子，可調節(jié)多個基因的轉錄活性。以上的研究表明mbr可能在bcl-2基因的表達調控中發(fā)揮重要的作用。 為了研究bcl-2基因的mbr序列在調節(jié)基因活性中的作用，探討轉錄因子SATB1與bcl-2mbr功能之間的關系，我們利用熒光素酶報告基因系統(tǒng)在不同的細胞系中研究bcl-2mbr對其下游報告基因活性的影響以及SAT

3、B1與mbr調控功能之間的關系。結果顯示mbr可以上調報告基因的表達，去除了SATB1結合位點后的mbr即喪失了其調控基因活性的功能。在細胞中過表達SATB1可以增強mbr上調報告基因活性的作用。 我們的研究結果證實bcl-2mbr具有調節(jié)基因活性的功能，并且其功能受到轉錄因子SATB1的影響。 第二部分利用mbr+/mbr-Nalm-6雜合子細胞系研究bcl-2mbr的調控功能 在第一部分研究中我們通過構建熒光

4、素酶報告基因重組質粒及細胞轉染實驗初步證明了bcl-2基因的mbr具有調節(jié)基因活性的功能，并且其調控功能受到轉錄因子SATB1的影響。但是bcl-2mbr位于bcl-2基因3'端非翻譯區(qū)并且距離bcl-2基因啟動子約200多kb，在體內它是否能夠克服這樣長的距離調節(jié)bcl-2基因的活性是我們必須回答的問題。為了更進一步探討bcl-2mbr在bcl-2基因表達調控中的作用，本實驗室成功構建了單等位基因mbr序列敲除的mbr+/mbr-Na

5、lm-6雜合子細胞系。在此基礎上我們采用熒光定量PCR的方法比較mbr+/mbr-Nalm-6雜合子細胞中bcl-2野生型等位基因與mbr打靶的等位基因之間mRNA水平的差異，以觀察mbr在bcl-2基因調控中的作用。同時對定量PCR引物對的擴增效率進行了評價。為了探討SATB1與mbr功能之間的關系，在SATB1高表達的Jurkat細胞中采用RNA干擾的方法干擾SATB1蛋白表達后檢測bcl-2蛋白表達水平。結果顯示敲除mbr的bcl