活性氧相關(guān)分子對唑類藥物藥效的影響.pdf

1、白假絲酵母菌（Candida albicans）是臨床最常見的條件致病性真菌，它寄居在人體不同的解剖部位，包括皮膚、口腔、胃腸道、陰道等，約占所有醫(yī)院真菌感染的50－60％，能夠引起多種疾病，尤其是皮膚感染、粘膜感染以及侵入性深部真菌感染。
　　 在正常宿主中，念珠菌是一種無害的共生物，檢出率幾乎達(dá)50％。正常機(jī)體有足夠的免疫力阻止白假絲酵母菌感染，但是當(dāng)外界因素打破菌群平衡，白假絲酵母菌在局部大量生長繁殖，就會導(dǎo)致感染。隨著氟

2、康唑長期大量應(yīng)用導(dǎo)致真菌耐藥性普遍產(chǎn)生，成為臨床上治療失敗的主要原因。目前抗真菌藥物的聯(lián)合應(yīng)用已經(jīng)成為臨床抗真菌治療的發(fā)展方向之一。但國內(nèi)外報道的聯(lián)合用藥多局限于少數(shù)抗真菌藥物之間的合用，有些抗真菌藥物合用反而產(chǎn)生拮抗作用?；钚匝醮兀≧eactive Oxygen Species，ROS）
　　 是細(xì)胞有氧代謝過程中產(chǎn)生的一組帶有未成對電子的化學(xué)性質(zhì)活潑的含氧自由基，主要包括超氧陰離子、羥基自由基、單線態(tài)氧和過氧化氫等。許多國內(nèi)

3、外文獻(xiàn)認(rèn)為白假絲酵母菌耐藥性與活性氧相關(guān)，但是直接針對體外應(yīng)用過氧化氫對唑類藥物藥效影響的報道較少。
　　 本課題首先通過體外實驗棋盤式微量稀釋法檢測了過氧化氫與氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑、硫康唑合用對8株臨床耐藥白假絲酵母菌的MIC80值，計算其相應(yīng)的FIC 指數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)以MIC80值為基礎(chǔ)，兩藥合用對全部8株菌（100％）
　　 皆表現(xiàn)出協(xié)同作用（FICI<0.5）。不同菌株的協(xié)同指數(shù)不同，但是均表現(xiàn)出協(xié)同效

4、果。
　　 其次通過平板紙片擴(kuò)散試驗看到，在加FLC平板上的含過氧化氫藥物紙片的抑菌圈與空白平板有顯著差異。在各類唑類藥物的瓊脂平板紙片擴(kuò)散試驗均得到了陽性結(jié)果。此外，我們運用另一升高活性氧的藥物寡霉素進(jìn)行紙片擴(kuò)散實驗，結(jié)果提示：寡霉素與各類唑類藥物也具有協(xié)同效果。當(dāng)使用抗氧化劑與唑類藥物合用時，分別通過體外實驗棋盤式微量稀釋法測定了NAC、GSH和唑類藥物對8株耐藥菌株，5株敏感菌株，釀酒酵母菌株(DY150)，以及SC531

5、4的藥物作用，結(jié)果顯示合用抗氧化劑時，唑類藥物的MIC80值會顯著提升(8倍以上)。進(jìn)一步驗證了增加ROS 會加強(qiáng)唑類的藥效，而降低ROS 則會減弱唑類藥物的藥效。同樣通過測定殺菌-時間曲線在藥物作用24h后，兩藥合用組的活菌濃度比氟康唑單用組有明顯降低，進(jìn)一步證實了降低ROS 則會減弱唑類藥物的藥效。第三部分驗證了敲除ROS 相關(guān)基因—硫氧化蛋白還原酶基因TRR1后，與野生酵母菌相比，氟康唑、咪康唑的MIC80值減低，結(jié)果顯示敲除TR

6、R1基因后，菌株對部分唑類藥物的敏感性增強(qiáng)，同時我們還測試了敲除trr1基因后的ROS水平驗證其對ROS的影響，進(jìn)一步驗證其唑類藥物藥效的影響。
　　 經(jīng)本課題的研究，我們發(fā)現(xiàn)過氧化氫有較強(qiáng)的協(xié)同氟康唑抗耐藥白假絲酵母菌作用，合用H2O2對MCZ的影響最大，菌株655、379、502、782、876的FICI值均小于同組其他藥物的FICI值。菌株103，958，649 則是FLC與H2O2合用的FICI值最小，同時使用抗氧化劑會