活性氧相關(guān)分子對(duì)唑類藥物藥效的影響.pdf

1、白假絲酵母菌（Candida albicans）是臨床最常見(jiàn)的條件致病性真菌，它寄居在人體不同的解剖部位，包括皮膚、口腔、胃腸道、陰道等，約占所有醫(yī)院真菌感染的50－60％，能夠引起多種疾病，尤其是皮膚感染、粘膜感染以及侵入性深部真菌感染。
　　 在正常宿主中，念珠菌是一種無(wú)害的共生物，檢出率幾乎達(dá)50％。正常機(jī)體有足夠的免疫力阻止白假絲酵母菌感染，但是當(dāng)外界因素打破菌群平衡，白假絲酵母菌在局部大量生長(zhǎng)繁殖，就會(huì)導(dǎo)致感染。隨著氟

2、康唑長(zhǎng)期大量應(yīng)用導(dǎo)致真菌耐藥性普遍產(chǎn)生，成為臨床上治療失敗的主要原因。目前抗真菌藥物的聯(lián)合應(yīng)用已經(jīng)成為臨床抗真菌治療的發(fā)展方向之一。但國(guó)內(nèi)外報(bào)道的聯(lián)合用藥多局限于少數(shù)抗真菌藥物之間的合用，有些抗真菌藥物合用反而產(chǎn)生拮抗作用。活性氧簇（Reactive Oxygen Species，ROS）
　　 是細(xì)胞有氧代謝過(guò)程中產(chǎn)生的一組帶有未成對(duì)電子的化學(xué)性質(zhì)活潑的含氧自由基，主要包括超氧陰離子、羥基自由基、單線態(tài)氧和過(guò)氧化氫等。許多國(guó)內(nèi)

3、外文獻(xiàn)認(rèn)為白假絲酵母菌耐藥性與活性氧相關(guān)，但是直接針對(duì)體外應(yīng)用過(guò)氧化氫對(duì)唑類藥物藥效影響的報(bào)道較少。
　　 本課題首先通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)棋盤式微量稀釋法檢測(cè)了過(guò)氧化氫與氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑、硫康唑合用對(duì)8株臨床耐藥白假絲酵母菌的MIC80值，計(jì)算其相應(yīng)的FIC 指數(shù)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)以MIC80值為基礎(chǔ)，兩藥合用對(duì)全部8株菌（100％）
　　 皆表現(xiàn)出協(xié)同作用（FICI<0.5）。不同菌株的協(xié)同指數(shù)不同，但是均表現(xiàn)出協(xié)同效

4、果。
　　 其次通過(guò)平板紙片擴(kuò)散試驗(yàn)看到，在加FLC平板上的含過(guò)氧化氫藥物紙片的抑菌圈與空白平板有顯著差異。在各類唑類藥物的瓊脂平板紙片擴(kuò)散試驗(yàn)均得到了陽(yáng)性結(jié)果。此外，我們運(yùn)用另一升高活性氧的藥物寡霉素進(jìn)行紙片擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)，結(jié)果提示：寡霉素與各類唑類藥物也具有協(xié)同效果。當(dāng)使用抗氧化劑與唑類藥物合用時(shí)，分別通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)棋盤式微量稀釋法測(cè)定了NAC、GSH和唑類藥物對(duì)8株耐藥菌株，5株敏感菌株，釀酒酵母菌株(DY150)，以及SC531

5、4的藥物作用，結(jié)果顯示合用抗氧化劑時(shí)，唑類藥物的MIC80值會(huì)顯著提升(8倍以上)。進(jìn)一步驗(yàn)證了增加ROS 會(huì)加強(qiáng)唑類的藥效，而降低ROS 則會(huì)減弱唑類藥物的藥效。同樣通過(guò)測(cè)定殺菌-時(shí)間曲線在藥物作用24h后，兩藥合用組的活菌濃度比氟康唑單用組有明顯降低，進(jìn)一步證實(shí)了降低ROS 則會(huì)減弱唑類藥物的藥效。第三部分驗(yàn)證了敲除ROS 相關(guān)基因—硫氧化蛋白還原酶基因TRR1后，與野生酵母菌相比，氟康唑、咪康唑的MIC80值減低，結(jié)果顯示敲除TR

6、R1基因后，菌株對(duì)部分唑類藥物的敏感性增強(qiáng)，同時(shí)我們還測(cè)試了敲除trr1基因后的ROS水平驗(yàn)證其對(duì)ROS的影響，進(jìn)一步驗(yàn)證其唑類藥物藥效的影響。
　　 經(jīng)本課題的研究，我們發(fā)現(xiàn)過(guò)氧化氫有較強(qiáng)的協(xié)同氟康唑抗耐藥白假絲酵母菌作用，合用H2O2對(duì)MCZ的影響最大，菌株655、379、502、782、876的FICI值均小于同組其他藥物的FICI值。菌株103，958，649 則是FLC與H2O2合用的FICI值最小，同時(shí)使用抗氧化劑會(huì)