西方蜜蜂(Apis mellifera)儲存蛋白hex70b和hex110的表達與功能研究.pdf

1、儲存蛋白是由幼蟲脂肪體細胞合成并分泌釋放到血淋巴內(nèi)，在變態(tài)發(fā)育時再被脂肪體細胞以受體介導(dǎo)的方式吸收，用于重新構(gòu)建蛹的組織與結(jié)構(gòu)。蜜蜂是全變態(tài)昆蟲，其個體發(fā)育歷經(jīng)卵、幼蟲、蛹和成蟲四個階段。其中幼蟲到蛹的變態(tài)發(fā)育階段需要降解幼蟲組織，重新構(gòu)建蛹的組織與結(jié)構(gòu)，這一過程涉及儲存蛋白的作用。昆蟲儲存蛋白的核心功能是為昆蟲從幼蟲到蛹的變態(tài)發(fā)育提供物質(zhì)基礎(chǔ)和保障。此外，儲存蛋白在不同的昆蟲體內(nèi)有不同的表達調(diào)控機制，擔(dān)負著從變態(tài)、級型、性別決定、產(chǎn)卵

2、、壽命到免疫等多樣的生物學(xué)功能。
　　為系統(tǒng)的探究儲存蛋白在蜜蜂體內(nèi)的表達模式及其可能的生物學(xué)功能，本試驗利用SDS-PAGE電泳技術(shù)在蛋白水平上對處于變態(tài)期前后的蜜蜂三型蜂的儲存蛋白進行檢測和分析，評價hexamerin在三型蜂變態(tài)發(fā)育中的作用。結(jié)果表明幼蟲期血淋巴內(nèi)蛋白含量較少，可檢測到的蛋白種類也較少。而到了預(yù)蛹期，血淋巴內(nèi)的蛋白含量迅速增高，蛋白的種類也迅速增加。且最為明顯的一個變化是該時期血淋巴新出現(xiàn)了4種含量極高的蛋白

3、，經(jīng)蛋白測序分析它們?yōu)槊鄯鋒examerin儲存蛋白，它們合計占據(jù)血淋巴總蛋白的80％以上，隨著變態(tài)發(fā)育過程的進行，這四種蛋白的含量也逐漸減少，至羽化時血淋巴內(nèi)基本檢測不到了。四種hexamerin蛋白在血淋巴的含量雖然在三型蜂發(fā)育期整體趨勢大體一致，但是在相同的發(fā)育時期，同一種hexamerin在工蜂、蜂王、雄蜂血淋巴內(nèi)的含量也有差別，在蜂王和雄蜂血淋巴內(nèi)含量比工蜂血淋巴內(nèi)含量要高，在三型蜂體內(nèi)表現(xiàn)出不完全一致表達的特性。
　　

4、RNAi普遍應(yīng)用于各種基因生物功能的研究中。大量合成純凈的dsRNA是RNAi相關(guān)試驗和實踐應(yīng)用的前提。本試驗采用試劑盒體外轉(zhuǎn)錄和用大腸桿菌誘導(dǎo)兩種方法合成hex110 dsRNA和hex70b dsRNA，均成功的獲得目標(biāo)的dsRNA。尤其是大腸桿菌誘導(dǎo)合成dsRNA的技術(shù)體系的建立，為后續(xù)功能研究及其他蜜蜂相關(guān)基因的應(yīng)用打下了基礎(chǔ)。在此基礎(chǔ)上。我們將合成的dsRNA分別對蜜蜂工蜂，雄蜂和蜂王進行飼喂和顯微注射兩種方法的干擾試驗，實驗

5、結(jié)果表明，dsRNA并沒有使hex110和hex70b基因沉默，hex110和hex70b仍有表達。干涉研究其功能的工作還需進一步的探究。
　　本試驗利用 SDS-PAGE電泳技術(shù)通過對處于變態(tài)期前后的蜜蜂三型蜂在蛋白水平上儲存蛋白進行檢測和分析，從蛋白層面評價hexamerin在三型蜂變態(tài)發(fā)育中的作用。進而利用試劑盒體外轉(zhuǎn)錄和大腸桿菌誘導(dǎo)兩種方法合成的hex110 dsRNA和 hex70b dsRNA，成功的建立了利用大腸桿菌