西方蜜蜂(Apismellifera)不同級型蛻皮激素早期應答因子ecr和usp的表達及功能分析.pdf

1、蛻皮激素（MH）是蛻皮酮及其類似物的總稱，類固醇激素羥基蛻皮酮（20E）是其主要活性形式。蛻皮激素在調(diào)控昆蟲變態(tài)過程中發(fā)揮著核心作用，昆蟲依靠體內(nèi)蛻皮激素滴度變化，調(diào)控整個變態(tài)發(fā)育歷程。本課題通過對蛻皮激素受體（EcR）與超氣門蛋白（USP）基因在西方蜜蜂三型蜂的不同發(fā)育歷期的表達規(guī)律進行研究，同時，我們利用RNA干擾技術進一步的對EcR與USP基因的表達機制進行分析。具體結(jié)果如下：
　　為探究蛻皮激素早期應答因子ecr和usp在

2、不同級型的西方蜜蜂體內(nèi)的時空表達情況及其他相關生物學功能和作用，本研究通過熒光定量PCR技術對不同級型、發(fā)育時期的西方蜜蜂中的ecr與usp表達水平進行檢測。結(jié)果表明，ecr、usp在工蜂小幼蟲體內(nèi)的表達與參照相同，隨后稍有增加，但在變態(tài)期急劇降至最低水平，而后的蛹期又逐步增加，在成年蜂時期的表達持續(xù)維持在較高水平；蜂王體內(nèi)的變化趨勢與工蜂基本類似，所不同的是各階段的表達量都顯著高于工蜂，且在產(chǎn)卵王體內(nèi)的表達顯著高于處女蜂王；雄蜂體內(nèi)e

3、cr的表達在小幼蟲時期稍高，但此后至蛹期都一直處于較低的表達水平，至蛹后期才稍有增加，但羽化后水平較低，老齡雄蜂體內(nèi)又稍有提高。但usp在雄蜂體內(nèi)的表達卻基本呈現(xiàn)出與發(fā)育時期無關的高表達，大致為參照的283倍。ecr與usp在三型蜂體內(nèi)的這種表達模式揭示了MH不僅調(diào)控蜜蜂生長發(fā)育、蛻皮變態(tài)，還可能與蜜蜂的生殖有關，而usp在雄蜂體內(nèi)的表達說明USP除了與EcR組成活性復合體參與MH調(diào)控蛻皮與生殖外，還可能具有其他的生物學功能。
　

4、　為了進一步研究EcR在西方蜜蜂三型蜂體內(nèi)的各個生物學功能，揭示其表達機制，本課題利用試劑盒合成dsRNA對ecr進行干擾試驗。通過向工蜂3日齡小幼蟲注射5μg/μL的dsRNA1μL，分別在12h、24h、36h、48h統(tǒng)計各組死亡數(shù)，并在兩組各取存活幼蟲進行半定量跑膠驗證。但從凝膠電泳圖上對比發(fā)現(xiàn)，試驗組與對照組并無明顯差異。
　　本課題利用熒光定量技術分析了EcR與USP在西方蜜蜂三型蜂各個發(fā)育歷期的表達情況，EcR在三型蜂

5、體內(nèi)都表現(xiàn)出明顯的時空特異性，但在成蜂階段，工蜂表達量基本保持不變，雄蜂從初羽化的低表達量到成熟期成倍增長至與工蜂基本相當?shù)乃?，蜂王從剛羽化至產(chǎn)卵階段也處于表達增加的趨勢，只是表達量更高，說明EcR與蜜蜂的生殖有關；USP在三型蜂中表達差異極顯著，在雄蜂體內(nèi)普遍差異不大的高表達，蜂王體內(nèi)是時相性的高表達，工蜂體內(nèi)時相性的低表達。這說明USP除了與EcR組成活性復合體參與MH調(diào)控蛻皮與生殖外，還可能參與其他生長和發(fā)育的調(diào)控。在利用雙鏈R