斑馬魚低氧應(yīng)答基因TGF-β1的表達特征及功能分析.pdf

1、低氧現(xiàn)象是池塘、水庫、湖泊及近海季節(jié)性發(fā)生的一種自然現(xiàn)象。近年來，水體富營養(yǎng)化致使低氧現(xiàn)象頻繁發(fā)生，水體低氧問題已成為制約水產(chǎn)養(yǎng)殖可持續(xù)發(fā)展的主要因素之一。因此，開展魚類耐低氧分子機制研究具有重要的理論意義和實踐價值。
　　轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)是一種多功能細胞因子，參與調(diào)節(jié)多種細胞活動，具有重要的生物學(xué)功能。在前期實驗中，我們利用抑制消減雜交技術(shù)從鯽魚囊胚細胞中篩選到低氧應(yīng)答基因TGF-β1。在此基礎(chǔ)上，本研究利用斑

2、馬魚活體實驗體系，初步研究了TGF-β1基因的表達特征及其在低氧適應(yīng)中的功能。取得的主要結(jié)果如下:
　　本研究通過NCBI獲得斑馬魚TGF-β1基因cDNA序列。斑馬魚TGF-β1 cDNA全長1571bp，編碼377個氨基酸。系統(tǒng)進化樹分析發(fā)現(xiàn)，TGF-β蛋白按照不同的類型嚴格聚類，斑馬魚TGF-β1與其他魚類的TGF-β1聚集到一個分支，在進化中非常保守。在斑馬魚胚胎發(fā)育過程中，RT-PCR和Real-Time PCR結(jié)果顯示

3、TGF-β1基因為母源表達基因，在分節(jié)期之前的表達水平比較低，從咽囊期開始持續(xù)高水平表達。胚胎整體原位雜交發(fā)現(xiàn)，TGF-β1基因在斑馬魚24hpf胚胎中開始有特異信號出現(xiàn)。TGF-β1基因的表達主要分布在腮弓、側(cè)線原基、耳囊、嗅覺基板、心臟和前腎等處。這些結(jié)果表明TGF-β1基因可能參與斑馬魚胚胎的免疫調(diào)節(jié)、循環(huán)系統(tǒng)發(fā)育和側(cè)線形成。
　　用低氧處理斑馬魚胚胎，發(fā)現(xiàn)低氧處理24小時后斑馬魚胚胎發(fā)育延遲。利用Real-Time PCR

4、和原位雜交檢測發(fā)現(xiàn)，低氧處理后發(fā)育延遲的斑馬魚胚胎中TGF-β1mRNA表達水平較常氧組顯著降低。RT-PCR和Real-Time RT-PCR結(jié)果顯示，TGF-β1基因在斑馬魚健康成魚各個組織器官中廣泛表達。TGF-β1的mRNA水平在斑馬魚成魚眼、腦、腮、心臟、肝臟、精巢和卵巢等多個組織器官中被低氧顯著誘導(dǎo)。利用PCR技術(shù)擴增斑馬魚TGF-β1ORF序列，將其連接到pEGFPN1載體上，構(gòu)建重組質(zhì)粒pEGFPN1-TGF-β1。將構(gòu)