基于斑馬魚疾病模型研究ADAR1基因的功能.pdf

1、目的：基于斑馬魚模型探討ADAR1基因?qū)z傳性對稱性色素異常癥(dyschromatosis symmetrica hereditaria，DSH)的影響，以及DSH患者皮損色素沉著區(qū)和色素減退區(qū)是否存在細胞凋亡，是否存在C-kit表達差異，旨在研究DSH發(fā)病機制以對其預(yù)防和治療提供幫助。
　　方法：①收集一DSH家系，并對其進行ADAR1基因測序檢測致病突變②利用morpholino技術(shù)下調(diào)斑馬魚 adar1基因表達，并在斑馬魚

2、48hpf及72hpf兩個時間點觀察引起的特異性表型。③在48hpf及72hpf兩個時間點觀察各組斑馬魚尾部黑素含量。④各組分別收集50個樣本并利用RT-PCR評估斑馬魚胚胎發(fā)育后8、16、28、32、36、52、64和76小時adar1基因表達，以證實adar1基因下調(diào)成功。⑤利用RT-PCR來探討胚胎發(fā)育后48小時及72小時各組間 wnt11、c-kit、mitf、rhoa及cdc42基因表達的差異。⑥收集DSH患者皮損標本并利用免

3、疫組化技術(shù)探討色素加深區(qū)和色素減退區(qū)C-kit表達的差異。⑦運用Tunel實驗技術(shù)探討DSH患者皮損色素加深區(qū)和色素減退區(qū)細胞的凋亡情況
　　結(jié)果：①在DSH家系患者中發(fā)現(xiàn)ADAR1基因的2號外顯子處存在移碼突變c.1019_1020delAG(p.Gln340Argfs*5)②DSH斑馬魚模型成功下調(diào)adar1基因的表達。③72小時adar1下調(diào)組斑馬魚尾部黑色素含量明顯高于空白對照組和單加嗎啡琳組。④adar1下調(diào)組中的斑馬魚

4、在48hpf和72hpf黑素細胞細胞極性發(fā)生改變，而在72hpf出現(xiàn)黑素細胞遷移和分布異常。⑤下調(diào)斑馬魚adar1基因的表達導致胚胎48hpf rhoa和cdc42的下調(diào)，72hpf wnt11的下調(diào)，48hpf及72hpf mitf、c-kit的下調(diào)。⑥C-kit表達在DSH患者皮損色素沉著區(qū)明顯高于色素減退區(qū)。⑦更多的細胞凋亡現(xiàn)象發(fā)生在DSH患者皮損色素減退區(qū)。
　　結(jié)論：基因測序分析在DSH家系中發(fā)現(xiàn) c.1019_1020