共培養(yǎng)體系中小鼠淋巴細(xì)胞RNA編輯酶ADAR1的表達(dá)及ADAR1在小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)通過建立共培養(yǎng)細(xì)胞體系，觀察小鼠淋巴細(xì)胞在異種抗原細(xì)胞的刺激下ADAR1的表達(dá)情況；并通過siRNA質(zhì)粒下調(diào)小鼠淋巴細(xì)胞ADAR1的表達(dá)，觀察ADAR1表達(dá)抑制后的淋巴細(xì)胞免疫功能的變化。首次系統(tǒng)的對(duì)ADAR1在不同功能狀態(tài)下淋巴細(xì)胞中的表達(dá)和在細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用進(jìn)行了研究，以探索A-to-IRNA編輯在免疫排斥反應(yīng)中的病理生理意義以及為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。 第一部分：共培養(yǎng)體系中小鼠淋巴細(xì)胞ADAR1的表達(dá)。

2、 將小鼠脾淋巴細(xì)胞分為三個(gè)處理組。實(shí)驗(yàn)組：以HCC(人肝細(xì)胞肝癌細(xì)胞)作為刺激細(xì)胞，以1∶5的比例與小鼠淋巴細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)；對(duì)照組：將小鼠淋巴細(xì)胞進(jìn)行相同培養(yǎng)條件下的單獨(dú)培養(yǎng)；免疫抑制組：將免疫抑制劑FK506預(yù)處理后的小鼠脾淋巴細(xì)胞，與刺激細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)。分別取培養(yǎng)1，2，4，6，，8，10，12，16，20及24h的各組小鼠淋巴細(xì)胞，用半定量PCR的方法檢測(cè)ADAR1的表達(dá)，觀察各處理組小鼠淋巴細(xì)胞ADAR1隨時(shí)間的表達(dá)變化曲線。

3、 結(jié)果顯示，共培養(yǎng)組RNA編輯酶ADAR1的表達(dá)呈降低后升高、再降低的趨勢(shì)；對(duì)照組呈一直降低、至12h后維持在較低的水平；FK506對(duì)ADAR1的表達(dá)呈現(xiàn)明顯的抑制，與共培養(yǎng)組和對(duì)照組相比，這種抑制隨著共培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而減弱。提示小鼠淋巴細(xì)胞ADAR1在異種抗原的刺激下表達(dá)活躍，其表達(dá)的高低與淋巴細(xì)胞的功能狀態(tài)有關(guān)。 第二部分：RNA編輯酶ADAR1在小鼠細(xì)胞免疫應(yīng)答中的作用研究。 構(gòu)建小鼠ADAR1反義質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染

4、實(shí)驗(yàn)證明干涉效果理想；反復(fù)凍融人肝癌細(xì)胞株，制備腫瘤細(xì)胞可溶性抗原，將分離出的小鼠原代淋巴細(xì)胞以ADAR1siRNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染，然后以腫瘤細(xì)胞可溶性抗原致敏，以此作為實(shí)驗(yàn)組；設(shè)原代培養(yǎng)未經(jīng)轉(zhuǎn)染的致敏小鼠淋巴細(xì)胞為對(duì)照組，采用細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ADAR1對(duì)淋巴細(xì)胞免疫功能的影響。 研究結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組淋巴細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用明顯弱于對(duì)照組(P＜0．05)。提示RNA編輯酶ADAR1在小鼠細(xì)胞免疫中有重要作用，下調(diào)RNA編輯酶ADAR1表