RNA編輯酶ADAR1對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力以及基因表達(dá)譜的影響.pdf

1、RNA編輯（RNA editing）是DNA轉(zhuǎn)錄成RNA后, RNA編輯酶（RNA editing enzyme）對(duì)前體mRNA中的核苷酸進(jìn)行刪除、添加或重新修飾的過程。它改變了基因的序列以及遺傳信息,從而產(chǎn)生廣泛的生理效應(yīng)。RNA編輯酶以脫氨方式使得RNA特異位點(diǎn)的腺嘌呤脫氨轉(zhuǎn)變?yōu)榇吸S嘌呤,或者是特異位點(diǎn)的胞嘧啶變?yōu)槟蜞奏?而次黃嘌呤在堿基配對(duì)時(shí)被識(shí)別為鳥嘌呤。這些替換使得原有遺傳密碼或者剪切位點(diǎn)發(fā)生轉(zhuǎn)變,從而使其編碼蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功

2、能發(fā)生改變。ADAR1 (RNA依賴性腺嘌呤脫氨酶,adenosine deaminase acting on RNA)是研究最為廣泛的一種RNA編輯酶。研究顯示淋巴細(xì)胞增殖時(shí)ADAR1 表達(dá)顯著升高，而降低ADAR1 表達(dá)后淋巴細(xì)胞殺傷功能顯著降低。提示ADAR1 可能通過調(diào)控細(xì)胞功能進(jìn)而影響排斥反應(yīng)的發(fā)生。本研究旨在探索細(xì)胞水平排斥反應(yīng)即經(jīng)典的雙向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)試驗(yàn)中，降低ADAR1 表達(dá)對(duì)淋巴細(xì)胞增殖能力以及其他基因表達(dá)的影響。

3、因此，本研究分為兩部分,探索ADAR1 對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力的影響以及對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜的影響。 試驗(yàn)第一部分: 目的: 探索ADAR1 對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖功能的影響。 方法: ADAR1 特異性siRNA 轉(zhuǎn)入小鼠原代淋巴細(xì)胞，觀察細(xì)胞增殖的變化；通過RT-PCR 檢測細(xì)胞中ADAR1 mRNA 的變化；細(xì)胞計(jì)數(shù)、臺(tái)盼蘭拒染法和四甲基偶氮唑藍(lán)（MTT）法檢測降低ADAR1 表達(dá)后對(duì)小鼠淋巴細(xì)胞增殖的影響

4、。 結(jié)果: 抑制ADAR1 表達(dá)24h 后實(shí)驗(yàn)組存活淋巴細(xì)胞數(shù)量顯著減少（P﹤0.01），而死亡細(xì)胞數(shù)量顯著增多（P﹤0.01），且MTT 結(jié)果與之相符（P﹤0.01）。ADAR1 mRNA表達(dá)受到明顯抑制；對(duì)照組ADAR1 表達(dá)沒有明顯變化，淋巴細(xì)胞受到抗原刺激而活化、增殖能力沒有明顯變化。說明ADAR1 的表達(dá)與淋巴細(xì)胞接受抗原刺激后活化及增殖能力密切相關(guān)。 結(jié)論：降低淋巴細(xì)胞ADAR1 表達(dá)后，淋巴細(xì)胞受到抗原刺激

5、而活化、增殖能力減弱，提示淋巴細(xì)胞增殖功能可能受到了抑制，而ADAR1 可能發(fā)揮了重要作用。 試驗(yàn)第二部分: 目的: 探索抑制ADAR1 表達(dá)后小鼠淋巴細(xì)胞基因表達(dá)譜變化情況。 方法: ADAR1 特異性siRNA 轉(zhuǎn)入小鼠原代淋巴細(xì)胞。采用DNA 微陣列技術(shù)檢測轉(zhuǎn)染24h 時(shí)小鼠淋巴細(xì)胞表達(dá)譜變化。 結(jié)果:抑制淋巴細(xì)胞內(nèi)ADAR1 表達(dá)后，在mRNA 水平上，393 個(gè)基因表達(dá)發(fā)生了變化，表達(dá)上調(diào)超過兩

6、倍的基因數(shù)目為78 個(gè)，下調(diào)超過2 倍的基因數(shù)目為315 個(gè)。表達(dá)下調(diào)基因包括細(xì)胞周期調(diào)控基因（例如CDC20、CDC14b 等）以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)基因（例如IRF1、JAK1 以及一系列嗅覺感受器受體基因等），說明ADAR1 的表達(dá)與淋巴細(xì)胞功能相關(guān)基因的表達(dá)關(guān)系密切。 結(jié)論：降低ADAR1 表達(dá)后可引起小鼠淋巴細(xì)胞一系列基因表達(dá)的變化，其中包括一系列與細(xì)胞功能密切相關(guān)的基因，提示ADAR1 可能通過調(diào)控其他基因進(jìn)而影響淋巴細(xì)胞的各