斑馬魚早期胚胎-幼魚急相期反應(yīng)基因表達(dá)模式研究及血清淀粉樣蛋白A(SAA)功能分析.pdf

1、急相期反應(yīng)在感染疾病的動物體內(nèi)被發(fā)現(xiàn),是生物體先天性免疫應(yīng)答的重要組成部分,是機(jī)體受到病源微生物的感染、創(chuàng)傷、腫瘤增生和炎癥等出現(xiàn)時(shí)所產(chǎn)生的一系列的生理反應(yīng),從而快速抵御外來微生物入侵,促進(jìn)創(chuàng)傷的修復(fù),維持穩(wěn)定的內(nèi)部環(huán)境,恢復(fù)機(jī)體正常生理功能。目前很多文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道在多種動物從魚類到哺乳動物體內(nèi)都發(fā)現(xiàn)急相期反應(yīng)的存在。在急相期反應(yīng)通常伴隨血清中急相期反應(yīng)蛋白(APPs)濃度的升高、身體發(fā)熱、血管滲透壓升高以及新陳代謝和身體病理性的變化。急

2、相期反應(yīng)蛋白一般是由肝臟合成并分泌到血清中成為血漿蛋白,組成急相期反應(yīng)的重要部分。在哺乳動物體內(nèi)急相期反應(yīng)通常是由Toll樣受體介導(dǎo)刺激誘導(dǎo)前炎癥因子(IL-1b和TNF-a)的產(chǎn)生,從而最終引起急相期反應(yīng)。根據(jù)急相期反應(yīng)蛋白的濃度變化可分為正急相期反應(yīng)蛋白和負(fù)急相期反應(yīng)蛋白。在人類體內(nèi)正急相期反應(yīng)蛋白有CRP、SAA、HP、C3、Bf等,白蛋白和鐵傳遞蛋白是負(fù)急相期反應(yīng)蛋白。在多種魚類體內(nèi)已經(jīng)證實(shí)有和人類同源的急相期反應(yīng)蛋白。近年來已

3、經(jīng)有報(bào)道證明 CRP、SAA、HP、LECT2、HAMP也是成年斑馬魚體內(nèi)的急相期反應(yīng)蛋白。在斑馬魚或其它魚類的早期發(fā)育的胚胎體內(nèi)是否也可以啟動急相期反應(yīng)提供免疫保護(hù)功能的研究相對還較少。
　　在本論文中我們研究了經(jīng)LPS刺激處理的斑馬魚早期胚胎體內(nèi)的急相期反應(yīng)基因(CRP, SAA, LECT2, HAMP和 HP)和急相期反應(yīng)的誘導(dǎo)基因(IL-1b和TNF-a)的表達(dá)情況來判斷早期胚胎體內(nèi)是否能夠啟動急相期反應(yīng)。實(shí)時(shí)熒光定量P

4、CR的結(jié)果顯示在LPS處理的斑馬魚早期胚胎中檢測的這七個(gè)基因在mRNA水平上的表達(dá)量都有顯著升高。胚胎原位雜交的結(jié)果顯示急相期反應(yīng)基因和急相期反應(yīng)誘導(dǎo)基因在正常發(fā)育的早期胚胎體內(nèi)都有母源性范表達(dá)情況,隨著胚胎發(fā)育這些基因又都表現(xiàn)出組織特異性表達(dá)模式。LPS對胚胎的刺激可以誘導(dǎo) SAA在胚胎的卵黃囊和腸道的特異性表達(dá);誘導(dǎo)HAMP在卵黃囊的表達(dá);誘導(dǎo)LECT2在卵黃囊的表達(dá)量升高;誘導(dǎo)IL-1b在胚胎的卵黃囊和尾部靜脈的一些血細(xì)胞中表達(dá)。

5、這些結(jié)果說明斑馬魚胚胎可以通過啟動急相期反應(yīng)類提供免疫保護(hù)功能。血清淀粉樣蛋白A(SAA)是斑馬魚急相期反應(yīng)的重要蛋白,在細(xì)菌感染的斑馬魚體內(nèi)表達(dá)量明顯上升。本文中我們利用體外原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了 SAA,在體外研究其功能,發(fā)現(xiàn)體外表達(dá)的重組SAA不能直接抑制細(xì)菌的繁殖但可以和革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌和革蘭氏陰性菌大腸桿菌和鰻弧菌結(jié)合,也可以和LPS和LTA結(jié)合,此外通過實(shí)驗(yàn)還表明重組蛋白SAA還可以促進(jìn)鯉魚的巨噬細(xì)胞對大腸桿菌和金黃色