歐文氏菌類胡蘿卜素合成酶CrtB和CrtI的原核表達(dá)與多克隆抗體制備.pdf

1、類胡蘿卜素是衡量小麥營(yíng)養(yǎng)品質(zhì)的重要指標(biāo)。為提高小麥中的類胡蘿卜素含量，本實(shí)驗(yàn)室將歐文氏菌類胡蘿卜素脫氫酶基因(CrtI)和八氫番茄紅素合成酶基因(CrtB)導(dǎo)入到了小麥模式品種Bobwhite中，并成功獲得了這兩個(gè)基因單轉(zhuǎn)和共轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)基因小麥。通過(guò)對(duì)轉(zhuǎn)基因后代的分析發(fā)現(xiàn)，導(dǎo)入這兩個(gè)基因的單轉(zhuǎn)和共轉(zhuǎn)的轉(zhuǎn)基因株系都導(dǎo)致了小麥胚乳中類胡蘿卜素含量的增加。在不同的轉(zhuǎn)基因株系中，CrtB和CrtI在轉(zhuǎn)錄水平上的表達(dá)情況已經(jīng)進(jìn)行了詳細(xì)的檢測(cè)分析。

2、r>　　為了進(jìn)一步檢測(cè)這兩個(gè)基因在轉(zhuǎn)基因小麥中翻譯水平上的變化情況與小麥類胡蘿卜素含量之間的關(guān)系，本研究分別構(gòu)建了CrtB和CrtI的原核表達(dá)載體pET32-CrtI和pET32-CrtB，并將其轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)菌株中。通過(guò)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)，分別得到了兩個(gè)基因的融合蛋白 His-Trx-s-CrtI和 His-Trx-s-CrtB。將融合蛋白進(jìn)行純化、免疫家兔，成功獲得了抗 CrtB和 CrtI蛋白的多克隆抗體。利用 w