PI3K、AKT1、AKT2和NFκB在2型糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠肝組織表達.pdf

1、目的：當今骨質(zhì)疏松和2型糖尿病在老年和生活方式西方化的人群中，已經(jīng)廣泛流行，并且因為骨折和血管并發(fā)癥的出現(xiàn)，對老年人的健康造成了嚴重的不良影響。最近的實驗和臨床研究提示二者在病因?qū)W方面彼此相關(guān)。低骨量常常在1型糖尿病患者中發(fā)現(xiàn)，其原因可能是多方面的，另外2型糖尿病患者骨密度可能是降低、正常或者增加，但是這兩種類型的糖尿病都與骨折風險增加相關(guān)。胰島素抵抗是2型糖尿病的主要特點，在2型糖尿病患者中，肝細胞可通過PI3K-AKT胰島素信號通路

2、異常導致糖代謝異常，PI3K-AKT信號通路與成骨細胞關(guān)系近年受到關(guān)注。當肝臟出現(xiàn)胰島素抵抗時，NFκB激活增加，同時成骨細胞或其前體細胞在促進破骨細胞形成時需依靠NFκB的激活配體RANKL的表達增加。目前2型糖尿病合并骨質(zhì)疏松機制不明，二者是否存在共同發(fā)病機理尚無報道。本研究在建立2型糖尿病合并骨質(zhì)疏松大鼠模型基礎(chǔ)上，檢測PI3K、AKT1、AKT2、NFκB因子在2型糖尿病合并骨質(zhì)疏松大鼠肝組織中的表達，并探討二者發(fā)病機制的相關(guān)性

3、。
　　方法：100只2.5-3月齡健康雌性Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機分為正常對照組(假手術(shù)組，NS組)24只，單純?nèi)ヂ殉步M(NOVX組)26只，2型糖尿病對照組(假手術(shù)組，DS組)24只，2型糖尿病去卵巢組(DOVX組)26只，組間大鼠體重差異無統(tǒng)計學意義。采用高糖高脂飼料喂養(yǎng)聯(lián)合小劑量STZ腹腔注射法制作2型糖尿病(T2DM)大鼠模型，雙側(cè)卵巢切除法制作骨質(zhì)疏松(OP)大鼠模型。于4周、8周、12周各組隨機選取5只大

4、鼠，麻醉處死后分離肝臟，進行肝組織取材并提取肝組織總RNA，應(yīng)用免疫組織化學方法檢測NS組、NOVX組、DS組、DOVX組肝組織PI3K、AKT1、AKT2、NFκB蛋白水平表達，反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)(RT-PCR)方法檢測PI3K、AKT1、AKT2、NFκBmRNA水平表達。使用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理實驗數(shù)據(jù)，所有實驗數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差(x±s)表示，計量資料多組間比較采用方差分析，P<0.05認為有統(tǒng)計學意義。
　

5、　結(jié)果：
　　1.肝臟PI3K表達水平
　　1.1 免疫組化結(jié)果：PI3K表達于肝細胞胞漿，去卵巢后4周時NOVX組表達明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組表達明顯低于DS組(P<0.05)，DS組表達明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組表達明顯高于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯高于DS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，D

6、OVX組明顯高于NOVX組(P<0.05)；去卵巢12周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　1.2 RT-PCR結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組表達高于NS組(P<0.05)，DOVX組表達低于DS組(P<0.05)，DS組表達明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組表達明顯高于NOVX組(P

7、<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯高于DS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯高于NOVX組(P<0.05)；去卵巢12周時NOVX組高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　2.肝臟AKT1表達水平
　　2.1 免疫組化結(jié)果：

8、AKT1表達于肝細胞胞漿，去卵巢后4周時NOVX組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組與DS組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組高于NS組(P

9、<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　2.2 RT-PCR結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組與DS組之間無

10、統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　3.肝臟AKT2表達水平
　　3.1 免疫組化結(jié)果：AKT2表達于肝細胞胞漿，去卵巢后4周時NOVX組高于NS組(P<0.05)，

11、DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組與NS組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NS與NOVX組及DS組與DOVX組之間均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05

12、)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　3.2 RT-PCR結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組與NS組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后8周時NS與NOVX組及DS組與DOVX組之間均無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.0

13、5)；去卵巢后12周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　4.肝臟NFκB表達水平
　　4.1 免疫組化結(jié)果：NFκB表達于肝細胞胞漿，去卵巢后4周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組與DS組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組與

14、NOVX組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；去卵巢后8周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　4.2 RT-PC

15、R結(jié)果：去卵巢后4周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組與DS組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組與NOVX組之間無統(tǒng)計學差異(P>0.05)；去卵巢后8周時NOVX組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明于低于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)；去卵巢后12周時NOVX組明顯高于NS組(P<0

16、.05)，DOVX組明顯低于DS組(P<0.05)，DS組明顯高于NS組(P<0.05)，DOVX組明顯低于NOVX組(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.單純?nèi)ヂ殉泊笫驪I3K、AKT1、AKT2、NFκB在肝組織表達較正常對照組總體上升高。
　　2.2型糖尿病大鼠PI3K、AKT1、AKT2、NFκB在肝組織表達較正常對照組總體上為先降低后增高趨勢。
　　3.2型糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠PI3K、AKT1、AKT