GLP-1R、PKA在2型糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠肝組織表達(dá).pdf

1、目的:糖尿病(DiabetesMellitus，DM)與骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis，OP)均為慢性代謝性疾病，隨著病程延長(zhǎng)，可導(dǎo)致多種并發(fā)癥及合并癥，嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量，給社會(huì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。隨著人均壽命普遍延長(zhǎng)，二者發(fā)病率逐漸上升。近年來，GLP-1（Glucagon-likePeptide-1，胰高血糖素樣肽-1）及其信號(hào)通路對(duì)糖尿病的作用得到廣泛關(guān)注。GLP-1為葡萄糖依賴性的刺激胰腺產(chǎn)生胰島素并抑制胰高糖素分泌

2、，可通過刺激迷走神經(jīng)和中樞受體，減少食物攝入量，降低體重，可通過減緩胃排空速度調(diào)節(jié)血糖。近年來，關(guān)于GLP-1對(duì)骨代謝的影響成為研究熱點(diǎn)，研究發(fā)現(xiàn)，GLP-1受體在成骨細(xì)胞前體表達(dá)，敲除GLP-1受體后，小鼠可患骨質(zhì)疏松癥。目前發(fā)現(xiàn)糖尿病與骨質(zhì)疏松癥之間相互影響，但二者是否存在共同的發(fā)病機(jī)理尚無相關(guān)報(bào)道。本研究通過比較正常對(duì)照、2型糖尿病、骨質(zhì)疏松和2型糖尿病骨質(zhì)疏松大鼠之間肝臟組織GLP-1R(Glucagon-likePeptide

3、-1Receptor，胰高血糖素樣肽-1受體)及PKA(ProteinKinaseA，PKA，cAMP依賴蛋白激酶，簡(jiǎn)稱激酶A)表達(dá)的差異，研究糖尿病骨質(zhì)疏松癥發(fā)生發(fā)展是否與GLP-1受體/PKA信號(hào)通路有關(guān)，并說明二者是否可能存在與GLP-1有關(guān)的共同發(fā)病機(jī)理。
　　 方法:100只2.5-3月齡雌性健康Wistar大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周，隨機(jī)分為正常對(duì)照組(NC組)24只，2型糖尿病(DC組)24只，單純?nèi)ヂ殉步M(NOVX組)2

4、6只，2型糖尿病去卵巢組(DOVX組)26只，各組間大鼠體重?zé)o顯著差異。實(shí)驗(yàn)期間，NC組和NOVX組以常規(guī)飼料喂養(yǎng)，DC組和DOVX組以高糖高脂飼料聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(Streptozotocin，STZ)腹腔注射法制造T2DM動(dòng)物模型。T2DM動(dòng)物模型建立成功后1周，在無菌條件下將四組大鼠進(jìn)行麻醉，NOVX組、DOVX組行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，NC組、DC組行假手術(shù)。于去卵巢術(shù)后0周（手術(shù)當(dāng)天）、4周、8周、12周末空腹?fàn)顟B(tài)下分別測(cè)定各組

5、大鼠體重、骨密度、血糖及胰島素水平，于4周、8周、12周各組隨機(jī)選取4只大鼠，麻醉處死后分離肝臟組織，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)NC組、DC組、NOVX組、DOVX組肝組織GLP-1R和PKA表達(dá)。使用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(x)±S）表示，計(jì)量資料多組間比較采用方差分析，P＜0.05被認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果:
　　 1大鼠體重:去卵巢0周時(shí)四組間體重?zé)o明顯差異;去卵巢

6、4周、8周、12周時(shí)，去卵巢組大鼠體重明顯高于其他三組，糖尿病組大鼠體重明顯低于另外三組。
　　 2大鼠骨密度:去卵巢后4周各組骨密度無明顯差異;去卵巢后8周、12周時(shí)，NOVX組骨密度低于NC組，DOVX組骨密度低于DC組;且隨實(shí)驗(yàn)進(jìn)程延長(zhǎng)，DOVX組骨密度下降趨勢(shì)最明顯，其次為NOVX組。
　　 3大鼠血清指標(biāo)比較
　　 3.1空腹血糖(FBG):STZ注射1周后，DOVX組與DC組大鼠FBG明顯高于NOVX

7、組與NC組，表明T2DM模型建立成功;去卵巢4周、12周時(shí)，DOVX組FBG明顯高于其余三組，去卵巢8周時(shí)DC組、DOVX組FBG均高于NC組。
　　 3.2胰島素水平(INS):去卵巢0周、4周、8周、12周，糖尿病組大鼠(DC組與DOVX組)INS明顯高于非糖尿病組大鼠(NC組與NOVX組)(P＜0.05)，但DC組與DOVX組、NC組與NOVX組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4肝臟GLP-1受體表達(dá)

8、r>　　 免疫組化:GLP-1受體表達(dá)于肝細(xì)胞胞膜及胞漿，去卵巢后4周時(shí)DOVX組表達(dá)最高，其次依次為DC組、NOVX組、NC組，DC組與NOVX組、NOVX組與NC組間無顯著差異;去卵巢后8周時(shí)NC組表達(dá)明顯低于DC組、DOVX組、NOVX組，DC組、DOVX組、NOVX組間無顯著差異;去卵巢后12周時(shí)NC組、DC組、DOVX組、NOVX組組間無顯著差異;NC組去卵巢后4周時(shí)表達(dá)低于去卵巢后8周時(shí)，去卵巢后8周時(shí)與去卵巢后12周時(shí)比

9、較無顯著差別;NOVX組去卵巢8周時(shí)表達(dá)明顯高于去卵巢4周和去卵巢12周時(shí)，這兩者間表達(dá)無顯著差異;DC組和DOVX組去卵巢12周時(shí)表達(dá)明顯低于8周、4周時(shí)，這兩者間表達(dá)無顯著差異。
　　 5肝臟PKA表達(dá)
　　 免疫組化:PKA表達(dá)于肝細(xì)胞胞漿，去卵巢后4周時(shí)DOVX組表達(dá)最高，其次依次為DC組、NOVX組、NC組，DC組與NOVX組間無顯著差異;去卵巢后8周時(shí)NC組表達(dá)最低，其次依次為DOVX組、NOVX組、DC組，

10、DOVX組、NOVX組、DC組間有差異;去卵巢后12周時(shí)DC組表達(dá)明顯高于NC組、DOVX組、NOVX組，NC組、DOVX組、NOVX組間無顯著差異;NC組去卵巢后12周時(shí)表達(dá)高于去卵巢后8周時(shí)，去卵巢后8周時(shí)與去卵巢后4周時(shí)比較無顯著差別;NOVX組去卵巢12周時(shí)表達(dá)明顯低于去卵巢4周和去卵巢8周時(shí)，這兩者間表達(dá)無顯著差異;DC組去卵巢8周時(shí)表達(dá)明顯高于4周、12周時(shí)，這兩者間表達(dá)無顯著差異;DOVX組去卵巢4周時(shí)表達(dá)最高，其次依次為

11、12周、8周時(shí)，這三者間表達(dá)有差異。
　　 結(jié)論:
　　 1同一時(shí)間比較，糖尿病組大鼠GLP-1R、PKA表達(dá)大多高于非糖尿病組大鼠?？紤]糖尿病可能影響GLP-1R、PKA肝細(xì)胞內(nèi)表達(dá)。
　　 2隨著時(shí)間延長(zhǎng)，DC組和DOVX組GLP-1R表達(dá)較前明顯下降。
　　 34周時(shí)DOVX組比DC組GLP-1R表達(dá)增加，考慮與骨質(zhì)疏松影響肝細(xì)胞內(nèi)GLP-1R表達(dá)有關(guān)。
　　 4PKA與GLP-1R水平趨勢(shì)