還原型谷胱甘肽及多烯磷脂酰膽堿對成人原代肝細(xì)胞培養(yǎng)的保護(hù)作用.pdf

1、目的:
　　研究還原型谷胱甘肽及多烯磷脂膽堿對分離后成人原代肝細(xì)胞培養(yǎng)的保護(hù)作用。
　　方法:
　　選擇成人良性病變的手術(shù)切除肝組織標(biāo)本，采用改良膠原酶灌注法分離提純肝細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察，血球計數(shù)法計數(shù)，用臺盼藍(lán)拒染法初步檢測細(xì)胞活性。實(shí)驗(yàn)分為兩部分，第一部分:根據(jù)還原型谷胱甘肽及多烯磷脂膽堿濃度不同，分為GSH0.1mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、5 mmol/L、10mmol/L組和PPC1μ m

2、ol/L、5μ mol/L、10μ mol/L組，MTT法分析細(xì)胞活性情況。第二部分:根據(jù)MTT結(jié)果，選取最優(yōu)濃度的GSH和PPC藥物分組，設(shè)置空白對照，收集培養(yǎng)的1、3、5、7天的上清液，檢測其中白蛋白、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶的含量變化。
　　結(jié)果:
　　1.改良膠原酶灌注法分離肝細(xì)胞總數(shù)可達(dá)109個以上;
　　2.臺盼藍(lán)拒染法測定新鮮分離的人原代肝細(xì)胞活率在90％以上;
　　3.不同濃度還原型谷胱甘肽及多烯磷

3、脂膽堿對原代肝細(xì)胞的活性均具有保護(hù)作用，其中GSH5mM組和PPC5μM組效果最為明顯;
　　4.檢測1-7天的空白組上清液中白蛋白含量沒有明顯差異(P＞0.05)，GSH組和PPC組上清液中白蛋白含量明顯增長，P＜0.05，第7天上清液中白蛋白含量大于空白對照組(P＜0.05);5.在1、3、5天時空白組ALT以及AST在細(xì)胞外液中含量明顯大于藥物組，結(jié)果有意義(P＜0.05)，前5天細(xì)胞外液中的ALT及AST漏出逐漸減少，在第