Pyridoxine對晚期糖基化終產(chǎn)物導(dǎo)致血小板功能損傷的保護作用及機制的研究.pdf

1、非胰島素依賴型糖尿病(Non-insulin dependent diabetes mellitus．NIDDM)是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率最高的疾病之一。心血管并發(fā)癥是NIDDM的主要致死致殘的原因。糖尿病所致的微血管病變、視網(wǎng)膜病變、神經(jīng)病變、腎血管以及大血管病變均會加速動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展。糖尿病微血管病變的高發(fā)率與其發(fā)病機制密切相關(guān)，有學(xué)者認為糖尿病高發(fā)率是由于血小板的功能異常所導(dǎo)致的。因為血小板本身在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過

2、程中起著極其重要的作用，并且在對NIDDM患者研究發(fā)現(xiàn)，其血小板均處于高活性狀態(tài)。激活血小板的因素很多，高血糖是導(dǎo)致糖尿病合并動脈粥樣硬化的一個重要因素。眾所周知，慢性高血糖是糖尿病血管并發(fā)癥的始動因素。體內(nèi)高血糖介導(dǎo)的代謝以及血液動力學(xué)改變可能是由于體內(nèi)晚期糖基化終產(chǎn)物(advanced glycation ends products，AGEs)的堆積造成的。大量研究表明:AGEs可以直接促進血小板聚集，但是其具體的機制少有報道。已有

3、研究證實，在內(nèi)皮細胞上，AGEs通過抑制內(nèi)皮依賴性一氧化氮(endothelial nitric oxide，eNOS)的活性產(chǎn)生損傷作用,然而在血小板上其具體機制目前尚未明確。 一氧化氮(NO)是內(nèi)皮產(chǎn)生的最主要的血管舒張因子，越來越多的研究證實NO除了具有血管舒張功能外，還具有抗血小板聚集以及維持血管內(nèi)環(huán)境平衡的作用。NO是L-精氨酸在一氧化氮合酶(NOS)催化下的產(chǎn)物，NOS有三種亞型：內(nèi)皮型(eNOS)，神經(jīng)型(nNOS

4、)和誘導(dǎo)型(iNOS)。目前研究認為存在于血小板上面的主要是eNOS。eNOS起調(diào)節(jié)心血管功能中起重要的作用，適當?shù)恼{(diào)節(jié)eNOS的生物活性可能成為預(yù)防一些心血管疾病的新靶點。已知P13k/Akt是影響內(nèi)皮eNOS活性的經(jīng)典信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，但是對于血小板上eNOS的活性調(diào)控信號通路的研究少有報導(dǎo)。 Pyridoxine是維生素B6的有效生物成分，在人體多種代謝過程中都起著很重要的作用?，F(xiàn)階段的研究發(fā)現(xiàn)其具有降低血液中高同型半胱氨酸濃度，以及

5、抑制血小板聚集等多種功效。Pyridoxine一直以來被認為是一種輔酶參與代謝過程.最近研究發(fā)現(xiàn)，pyridoxine可能通過eNOS途徑抑制低密度脂蛋白對于血管內(nèi)皮的損害，但pyridoxine是否可能在血小板上通過eNOS調(diào)節(jié)血小板功能，目前尚無相關(guān)報導(dǎo)。 本文的研究的目的是模擬體內(nèi)AGEs損傷血小板加速血小板聚集，加快血管病變的進程，觀察pyridoxine是否能抑制AGEs對血小板的損傷，測定血小板上eNOS活性和表達、

6、cGMP水平(NO生物活性的檢測指標)。用Western blotting檢測eNOS Ser<'1177>狀態(tài)以及與信號通路P13k/Akt的關(guān)系研究pyridoxine可能的保護機制。首先觀察了pyridoxine對于血小板聚集率的影響。結(jié)果顯示：pyridoxine呈濃度依賴性抑制血小板聚集率，當濃度達2 mmol/L時，其抑制聚集率的能力不再隨濃度增加而增加。因此，選取2 mmol/L作為有效保護濃度進行進一步的研究，發(fā)現(xiàn)pyr

7、idoxine可以逆轉(zhuǎn)AGEs(200mg/L)所引起的血小板聚集，首先從功能方面證實pyridoxine能抑制AGEs的損傷作用。第二步，本研究用Western blotting的方法檢測eNOS的表達及其磷酸化、糖基化的狀態(tài)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：pyridoxine可以增加eNOS的磷酸化水平，降低糖基化水平，并能pyridoxine可以抑制AGEs降低eNOS的磷酸化的作用。但是pyridoxine和AGEs對于eNOS總蛋白表達是沒有影響

8、的。用放射免疫的方法檢測cGMP(NO生物活性檢測指標)，結(jié)果顯示pyridoxine可以增加cGMP的濃度，并且能抑制AGEs對cGMP濃度降低的作用，說明pyrldoxlne和AGEs是通過改變eNOS的磷酸化狀態(tài)從而使NO的生成量發(fā)生相應(yīng)的變化，進而對血小板聚集率產(chǎn)生相應(yīng)的影響。最后又利用Westernblotting等方法驗證eNOS與信號通路P13k/Akt的關(guān)系。結(jié)果顯示AktSer<'473>狀態(tài)產(chǎn)生相應(yīng)的改變，并且加入P