14--3--3sigma在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌中作用及其機(jī)制的研究.pdf

1、背景:
　　肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌（intrahepatic cholangiocarcinoma，ICC）是僅次于肝細(xì)胞癌的第二種最常見(jiàn)的原發(fā)性肝癌。目前全球范圍內(nèi)，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌近年來(lái)的發(fā)病率和死亡率在逐年上升。雖然近幾十年來(lái)肝臟腫瘤切除、藥物治療及肝臟移植等治療手段取得諸多進(jìn)展，但是由于肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌生長(zhǎng)迅速，具有較高侵襲轉(zhuǎn)移能力，肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者的長(zhǎng)期預(yù)后仍然不理想。目前，即使是行根治性切除術(shù)后的ICC患者，其5年生存率仍只有2

2、0％～35％。所以，為了提高肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的早期診斷率從而讓更多的患者得以接受早期的外科手術(shù)治療，我們需要尋找敏感的肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的分子標(biāo)記物并且探究其機(jī)制。
　　目的:
　　14-3-3sigma蛋白在細(xì)胞周期調(diào)控、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分化等多個(gè)過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，14-3-3sigma的作用機(jī)制尚不清楚。本研究探討了肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者的14-3-3sigma的表達(dá)與臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系

3、。此外，本研究在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞系HCCC-9810和RBE中探究14-3-3sigma的生物學(xué)功能。
　　方法:
　　(1)提取28例ICC患者腫瘤組織及配對(duì)癌旁組織的冰凍標(biāo)本的mRNA，并收集他們的腫瘤及癌旁組織石蠟標(biāo)本，利用實(shí)時(shí)熒光定量PCR、免疫組化等技術(shù)驗(yàn)證14-3-3sigma在ICC腫瘤組織以及癌旁組織的表達(dá)情況。此外，應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法對(duì)100例肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者腫瘤組織和24例正常人肝組織的組織芯片進(jìn)行

4、了分析。
　　(2)根據(jù)免疫組化結(jié)果，探究14-3-3sigma與肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌病人臨床病理特征及預(yù)后之間的關(guān)系。
　　(3)在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞系中，通過(guò)轉(zhuǎn)染14-3-3sigma小干擾RNA的方式干擾14-3-3sigma，通過(guò)細(xì)胞層面的實(shí)驗(yàn)，如劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell實(shí)驗(yàn)等，探索14-3-3sigma在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞增殖、凋亡、侵襲轉(zhuǎn)移的過(guò)程中所發(fā)揮的作用。
　　結(jié)果:
　　14-3-3sigma在

5、肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌組織中呈高表達(dá)。在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌患者中14-3-3sigma的表達(dá)越高，預(yù)后越差。在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌細(xì)胞系中，敲低14-3-3sigma可以減少腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲和失巢凋亡抵抗能力。此外，敲低14-3-3sigma后，腫瘤細(xì)胞中侵襲相關(guān)蛋白MMP2和MMP9表達(dá)的顯著減少。
　　結(jié)論:
　　我們的研究結(jié)果揭示了14-3-3sigma的預(yù)后價(jià)值以及它在肝內(nèi)膽管細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移過(guò)程中的作用和機(jī)制。14-3-3sigma有