衰老小鼠睪丸睪酮合成功能障礙的機制研究.pdf

1、背景：當前人口老齡化激發(fā)人們對于衰老以及衰老相關疾病研究的極大興趣。臨床資料表明男性衰老過程中血清睪酮水平下降與性腺機能減退等疾病發(fā)病相關。
　　目的：探討衰老相關的睪酮水平降低的機制及睪丸組織和附睪脂肪組織氧化應激和內質網應激對睪丸間質Leydig細胞睪酮合成功能的影響。
　　方法：安徽醫(yī)科大學動物中心購買不同年齡段的C57BL/6J雄性小鼠，分3組：①3個月齡組（young組，n=8），②12個月齡組（middle-ag

2、ed組，n=8），③24個月齡組（aged組，n=8）。處死并解剖小鼠后，一側睪丸組織做成石蠟切片，免疫組織化學法觀察 F4/80標記的巨噬細胞浸潤情況和3β-HSD的表達情況；Western blotting分別檢測附睪脂肪組織中NF-kB，GRP78和抗氧化物 GPx4，MnSOD，睪丸組織中合成睪酮相關蛋白/酶，內質網應激分子GRP78,以及SIRT1和抗氧化物MnSOD，GPx4的蛋白表達情況；Real-time RT-PCR檢

3、測睪丸組織中合成睪酮相關蛋白/酶mRNA的表達，抗氧化物和內質網應激分子mRNA的表達情況。
　　結果：
　　1.組織學變化：使用抗3β-HSD單克隆抗體標記Leydig細胞免疫組化染色結果顯示，Leydig細胞數量在三組中沒有顯著差異，而利用圖像分析軟件IPP6.0分析平均光密度發(fā)現(xiàn)3β-HSD在aged組表達強度明顯低于young組(p<0.01)。巨噬細胞特異性抗體F4/80進行免疫組織化學染色結果顯示aged組睪丸組

4、織中的巨噬細胞數量明顯高于young組(p<0.01)。
　　2.衰老相關睪酮合成蛋白酶降低：在睪丸組織中，StAR和 P450scc表達水平在middle-aged組要顯著低于young組(p<0.05)，在aged組持續(xù)下降。Cyp17a的mRNA表達水平與young組相比middle-aged組呈現(xiàn)下降趨勢，在aged組中出現(xiàn)顯著的下降(p<0.05)。Hsd17b的mRNA表達水平middle-aged組和aged組較yo

5、ung組呈顯著下降(p<0.05)。
　　3.衰老過程中小鼠睪丸組織抗氧化系統(tǒng)功能降低：SIRT1蛋白表達從 middle-aged組開始降低，到aged組降低的程度有統(tǒng)計學差異(p<0.05)。同時與young組比較，aged組和middle-aged組中Sirt1的mRNA水平明顯降低(p<0.05)。在睪丸組織中，MnSOD和 GPx4蛋白的表達 middle-aged組低于young組(p<0.05)，aged組較midd

6、le-aged組繼續(xù)下降(p<0.05)。Sod2和 Gpx4的 mRNA水平在 aged組和middle-aged組中要明顯低于young組(p<0.05)。
　　4.衰老小鼠睪丸組織內質網應激標志表達上調：middle-aged組GRP78蛋白的表達較young組顯著升高，aged組較middle-aged組顯著增高(p<0.05)。Grp78和Chop的mRNA水平表現(xiàn)相似的趨勢。
　　5.衰老小鼠附睪脂肪組織抗氧化系

7、統(tǒng)功能降低，內質網應激標志和 NF-kB表達上調：aged組抗氧化物MnSOD和GPx4的表達低于young組(p<0.05)，內質網應激標志GRP78和促炎因子NF-kB在aged組中表達顯著增高(p<0.05)。
　　結論:本課題研究結果表明老年小鼠睪丸組織睪酮合成相關蛋白/酶表達減少與衰老相關睪酮水平降低有關，睪丸組織和附睪脂肪組織中存在的氧化應激、內質網應激及炎性反應可能是引起衰老相關的睪丸Leydig細胞睪酮合成能力減低