p16INK4a在特發(fā)性膜性腎病中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的:膜性腎病(membranous nephropathy，MN)是引起成人腎病綜合征常見的病理類型之一，是以腎小球基底膜(glomemlar basementmembrane，GBM)上皮細(xì)胞下免疫復(fù)合物沉積伴基底膜彌漫性增厚為特征的一組疾病。根據(jù)病因可將MN分為特發(fā)性膜性腎病(idiopathicmembranous nephropathy，IMN)和繼發(fā)性膜性腎病(secondary membranousnephropathy，

2、SMN)，病因不明者稱為IMN。SMN的病因主要包括感染、腫瘤、藥物、毒物及其他自身免疫性疾病等。IMN好發(fā)于中老年人，發(fā)病高峰年齡為40～50歲，男女比例約為2∶1，成人與兒童比例約為26∶1。有調(diào)查報道顯示，IMN占我國原發(fā)性腎小球疾病的9.89％。IMN臨床過程多樣，僅有1/4至1/3的患者可在5年內(nèi)達(dá)到完全自發(fā)性緩解，兒童中可達(dá)50％，40％的患者在5-15年后進(jìn)展為終末期腎病(end-stage renal disease，E

3、SRD)，故積極探索防治MN的有效途徑，以阻止或延緩其進(jìn)展至ESRD是我們現(xiàn)階段的首要任務(wù)。
　　IMN的發(fā)病機(jī)制尚不完全明確，一般認(rèn)為是在外界環(huán)境及內(nèi)在因素的刺激下，循環(huán)免疫復(fù)合物沉積或原位免疫復(fù)合物形成導(dǎo)致免疫反應(yīng)，上皮側(cè)出現(xiàn)免疫復(fù)合物及膜攻擊復(fù)合物C5b-9的形成，造成局部組織損傷。目前已發(fā)現(xiàn)的成人IMN的特異性靶抗原包括M型磷脂酶A2受體(M-typephospholipase A2 receptor，PLA2R)、醛糖還

4、原酶(aldose reductase，AR)和超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase，SOD2)。研究顯示，在IMN患者腎活檢標(biāo)本中發(fā)現(xiàn)了細(xì)胞衰老的標(biāo)志物p16INK4a，因此推測，細(xì)胞的衰老可能參與了IMN的發(fā)生發(fā)展。
　　細(xì)胞衰老(cell senescence)是指細(xì)胞在結(jié)構(gòu)和功能上逐漸出現(xiàn)的退行性變化，是一種不可逆轉(zhuǎn)的生長停滯現(xiàn)象。真核細(xì)胞周期主要有兩個重要的調(diào)控點，即G1-S和G2

5、-M，而衰老細(xì)胞停滯于G1期，不能順利進(jìn)入S期。細(xì)胞周期受調(diào)節(jié)因子的調(diào)控，其中細(xì)胞周期蛋白(cyclin)和細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent kinase，CDK)促進(jìn)細(xì)胞增殖、分化，是細(xì)胞周期的正調(diào)節(jié)因子;而細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子（cyclin-dependent kinase inhibitor，CKI）通過抑制CDK的活性，導(dǎo)致細(xì)胞周期停止，是細(xì)胞周期的負(fù)調(diào)節(jié)因子。目前已知CKI分為兩類:一類為p1

6、6家族，包括p15、p16、p18、p19，這些基因能特異性地抑制cyclinD-CDK4/6-pRb的磷酸化過程;另一類為p21家族，包括p21、p27和p57，對CDK有廣泛抑制作用。研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞衰老時p16INK4a基因的mRNA轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)水平均明顯增高，而且當(dāng)年輕細(xì)胞中導(dǎo)入p16INK4a后可出現(xiàn)衰老表型，因此認(rèn)為，p16INK4a是細(xì)胞壽限的關(guān)鍵調(diào)控基因。P16INK4a表達(dá)于正常成人的衰老組織中，通過p16INK4a-

7、cyclinD/CDK4/6-pRb-E2F途徑調(diào)控細(xì)胞周期，影響細(xì)胞壽命。許多外界刺激和內(nèi)在因素也可上調(diào)p16INK4a的表達(dá)，從而導(dǎo)致正常細(xì)胞過早的出現(xiàn)衰老表型。
　　本研究旨在分析p16INK4a在IMN患者腎組織中的表達(dá)，探索細(xì)胞衰老與IMN發(fā)病機(jī)制的相關(guān)性，從而進(jìn)一步揭示IMN的發(fā)病機(jī)制，為指導(dǎo)臨床治療及判斷預(yù)后提供依據(jù)。
　　方法:選取河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院腎內(nèi)科于2014年6月至2015年1月診治的IMN患者30

8、例（Ⅰ組），所有患者均為首次經(jīng)腎穿刺活檢病理檢查確診，并應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測患者腎組織中抗PLA2R抗體的表達(dá)呈陽性，將其按年齡分為18-29年齡組（Ⅰa組）、30-49年齡組(Ⅰb組)、50-69年齡組（Ⅰc組）。同時收集首次經(jīng)腎穿刺活檢病理檢查確診的微小病變性腎病(minimal change disease，MCD)患者9例為對照組(Ⅱ組)，同樣將其按年齡分為18-29年齡組（Ⅱa組）、30-49年齡組（Ⅱb組）、50-69年

9、齡組（Ⅱc組）。應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測IMN組和MCD組患者腎組織中p16INK4a的表達(dá)及表達(dá)部位，結(jié)果通過圖像分析系統(tǒng)(Image-ProPlus，IPP)進(jìn)行半定量分析。應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，P＜0.05時差異有統(tǒng)計學(xué)意義。計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，計數(shù)資料采用率或構(gòu)成比表示。正態(tài)分布資料組間均數(shù)比較采用兩獨立樣本均數(shù)的t檢驗。相關(guān)性檢驗采用直線相關(guān)分析。
　　結(jié)果:P16INK

10、4a在IMN組和MCD組患者腎組織腎小管上皮細(xì)胞核中均有表達(dá)，表達(dá)無明顯差異;p16INK4a在IMN組患者腎組織腎小囊壁層上皮細(xì)胞核和足細(xì)胞核中均有一定表達(dá)，在MCD組有極少表達(dá)，各年齡組IMN患者腎組織腎小球內(nèi)p16INK4a的表達(dá)較MCD組均顯著增強(qiáng)(P＜0.01)。各年齡組IMN患者腎小球內(nèi)p16INK4a的表達(dá)與24小時尿蛋白定量均呈正相關(guān)(ra0.978, P＜0.001; rb=0.874,P=0.001，P＜0.05;