人肝癌p16INK4a、p15INK4b基因突變及其肝癌惡性表型逆轉(zhuǎn)的研究.pdf

1、四川大學(xué)博士學(xué)位論文人肝癌p16INK4a、p15INK4b基因突變及其肝癌惡性表型逆轉(zhuǎn)的研究姓名：覃揚(yáng)申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專(zhuān)業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：傅明德20041018四川土學(xué)博士學(xué)位論文中文摘要含子和第2外顯子的PCR擴(kuò)增片段(168bp)存在三種多態(tài)性，(A、B、B’)，其中B型居多(48％，15／31)，B7型次之(26％，8／31)，A型最少(13％，4／31)，8例正常人白細(xì)胞中存在兩種多態(tài)性(B，B7)，分別為3

2、75％(3／8)和625％(5／8)。2在31例人原發(fā)性肝癌和癌旁肝硬化組織中，用PCR擴(kuò)增出p16INK4a基因第1外顯子和第1內(nèi)含子的204bp片段、第2、3外顯子和第2內(nèi)含子的PCR擴(kuò)增片段(362bp)，其中362bp片段被SmaI限制性酶切為114bp和248bp。SSCP分析均未發(fā)現(xiàn)任何標(biāo)本有異常遷移率的電泳區(qū)帶。8例正常人白細(xì)胞中亦未見(jiàn)多態(tài)性。3在31例人原發(fā)性肝癌和癌旁肝硬化組織中，僅1例癌旁肝硬化組織顯示出異常遷移的p

3、15INK4b第2外顯子345bp的SSCP單鏈帶，同一患者的肝癌組織為正常單鏈帶。其余肝癌和肝旁組織未見(jiàn)異常單鏈帶。8例正常人白細(xì)胞表現(xiàn)為一致性單鏈帶，未發(fā)現(xiàn)多態(tài)性。經(jīng)克隆和序列分析異常單鏈帶，顯示出此p15INK4b基因第2外顯子以及上游60個(gè)核苷酸的序列與國(guó)內(nèi)外報(bào)道一致。4在31例人原發(fā)性肝癌、癌旁以及遠(yuǎn)癌肝組織中，發(fā)現(xiàn)4例p161NK4a基因第1外顯子和部分第l內(nèi)含子區(qū)域缺失，缺失率為13％，第2外顯子和部分第2內(nèi)含子區(qū)域未見(jiàn)缺

4、失。小結(jié)：上述結(jié)果表明人原發(fā)性肝癌p16INK4a和p151NK4b基因突變以及p16INK4a基因缺失稀少，提示缺失與突變并不是人原發(fā)性肝癌中p16INK4a和p15INK4b基因失活的主要機(jī)制，而可能存在其它機(jī)制。第二部分：p16INK4a和plSINK4b對(duì)人肝癌細(xì)胞增殖和凋亡影響的研究結(jié)果：1在兩個(gè)用于基因轉(zhuǎn)染的肝癌細(xì)胞系BEL7402，SMMC7721的遺傳背景鑒定中未發(fā)現(xiàn)p16INK4a基因第1、2外顯子以及第l、2內(nèi)含子、