骨髓增生異常綜合征患者P15INK4B、FHIT基因甲基化的研究.pdf

1、研究目的:
　　 1.探討P15INK4B基因和FHIT基因甲基化異常與骨髓增生異常綜合征（MDS）發(fā)病機(jī)制的關(guān)系；
　　 2.分析骨髓增生異常綜合征（MDS）患者免疫表型的特征；
　　 3.分析骨髓增生異常綜合征（MDS）患者細(xì)胞免疫功能的表達(dá)特點(diǎn)。
　　 方法:
　　 選擇50例骨髓增生異常綜合征（MDS）患者和10例正常對(duì)照為研究對(duì)象，進(jìn)行如下檢測(cè)：
　　 1．甲基化PCR（meth

2、ylation-specific PCR,MSP）檢測(cè)P15INK4B基因和FHIT基因甲基化情況；
　　 2．變性高效液相色譜(denaturing high-performance liquid chromatography, DHPLC)檢測(cè)P15INK4B基因和FHIT基因甲基化情況；
　　 3．流式細(xì)胞儀檢測(cè)MDS患者骨髓細(xì)胞免疫表型；
　　 4．流式細(xì)胞儀檢測(cè)MDS患者淋巴細(xì)胞亞群；
　　 5

3、．R 顯帶技術(shù)檢測(cè)MDS患者染色體核型
　　 6．熒光原位雜交技術(shù)（FISH）檢測(cè)MDS患者細(xì)胞遺傳學(xué)情況。
　　 結(jié)果:
　　 1．根據(jù)國(guó)際預(yù)后積分系統(tǒng)（IPSS），將所有MDS患者分為低危組、中危-1組、中危-2組和高危組。低危組/中危-1組、中危-2組和高危組P15INK4B基因甲基化陽(yáng)性率分別為15.4％、51.9％、70.0％，F(xiàn)HIT基因甲基化陽(yáng)性率分別為7.7％、40.7％、60.0％，且P15IN

4、K4B基因和FHIT基因甲基化在三組間的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.596,,P=0.022; χ2=7.285,P=0.026），其中低危組/中危-1組P15INK4B基因和FHIT基因甲基化陽(yáng)性率低于高危組，且兩組間的差異有顯著性（P<0.05/3），而低危組/中危-1組與中危-2組、中危-2組與高危組間差異都無(wú)顯著性；兩個(gè)基因的甲基化沒(méi)有關(guān)聯(lián)性；
　　 2．隨著MDS 疾病的進(jìn)展，CD34+細(xì)胞比例逐漸升高，分別為：難治性

5、貧血/環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞性難治性貧血（RA/RAS）7.43％，難治性貧血伴原始細(xì)胞增多（RAEB）36.81％，難治性貧血伴原始細(xì)胞增多轉(zhuǎn)化型（RAEB-T）56.45％，且三組間及各組間的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；髓系抗原CD33、CD13、HLA-DR表達(dá)逐漸增加，CD14、CD15抗原表達(dá)隨著疾病的進(jìn)展逐漸減少，三組間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；B 淋巴細(xì)胞表面抗原CD19、CD10的表達(dá)隨著疾病進(jìn)展而減少；CD1

6、9抗原表達(dá)分別為3.05％、2.04％和1.05％，三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=8.236，P=0.002），且各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；CD10抗原表達(dá)分別為9.95％、8.07％和3.67％，三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=6.919，P=0.004），其中RA/RAS組與RAEB-T組、RAEB組與RAEB-T組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；T淋巴細(xì)胞表面抗原CD7表達(dá)隨著疾病進(jìn)展而增加，分別為RA/R

7、AS 2.63％、RAEB 10.79％和RAEB-T 11.00％，三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），其中RA/RAS組與RAEB組、RAEB-T組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3．與正常對(duì)照組相比，MDS組的Th、Th/Ts、NK細(xì)胞的表達(dá)均減低，分別為37.09％、1.63％、10.26％，Ts細(xì)胞的表達(dá)增高，為25.49％；隨著MDS 疾病的進(jìn)展，RA/RAS、RAEB和RAEB-T組Th細(xì)胞的表達(dá)

8、分別為33.08％、34.19％、46.58％，各組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Ts細(xì)胞的表達(dá)分別為24.19％、28.69％、27.50％，其中只有RA/RAS組與RAEB組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.027）；Th/Ts 比值分別為1.43、1.24、1.72，NK細(xì)胞的表達(dá)分別為8.41％、10.70％、11.29％。各組間Th、Th/Ts 比值、NK細(xì)胞的表達(dá)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 1．P15INK4B基