骨髓增生異常綜合征中ZO-1基因甲基化狀態(tài)的研究.pdf

1、骨髓增生異常綜合征(Myelodysplastic syndrome，MDS)部分異常增生的克隆細(xì)胞在疾病演變中細(xì)胞周期抑制和細(xì)胞分化控制基因失表達(dá)，而導(dǎo)致細(xì)胞惡變。多種基因啟動子區(qū)CpG島高甲基化導(dǎo)致相應(yīng)基因沉默，在MDS發(fā)生發(fā)展中起很重要的作用。本室于力等應(yīng)用RLGS方法篩查出ZO-1基因可能是一個血液系統(tǒng)惡性疾病相關(guān)基因。并發(fā)現(xiàn)它的啟動子區(qū)異常甲基化可能是惡性疾病發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵機(jī)制。ZO-1是膜結(jié)合鳥苷酸激酶家族(MAGUK)的成

2、員，在維持正常胞旁屏障通透性及調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖分化中起重要作用，且ZO-1的表達(dá)狀況與腫瘤分化及癌演進(jìn)密切相關(guān)。前期研究發(fā)現(xiàn)：在人白血病細(xì)胞系HL60中ZO-1基因啟動子區(qū)呈高甲基化狀態(tài)，該基因表達(dá)沉默。提示ZO-1基因與白血病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可能起到抑癌基因的作用。 本文旨在探討ZO-1基因異常甲基化在骨髓增生異常綜合征(MDS)診斷中作為基因標(biāo)志的臨床意義。首先，我們以白血病細(xì)胞系HL60、一例MDS患者及一例健康人的骨髓原代

3、細(xì)胞為研究對象，采用硫化測序的方法進(jìn)行ZO-1基因啟動子區(qū)CpG位點(diǎn)的甲基化狀況分析。結(jié)果顯示：(1)HL60細(xì)胞系CpG位點(diǎn)總陽性率為96.74％。(2)健康人原代骨髓細(xì)胞CpG位點(diǎn)總陽性率為0.93％。提示健康人ZO-1基因啟動子區(qū)CpG島呈低甲基化狀態(tài)。(3)MDS患者原代骨髓細(xì)胞CpG位點(diǎn)的甲基化陽性率為6.51％。說明ZO-1基因CpG島在MDS患者骨髓的惡性細(xì)胞中存在異常甲基化現(xiàn)象。(4)健康人與MDS患者原代骨髓細(xì)胞的甲基

4、化陽性位點(diǎn)比例的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示ZO-1基因啟動子區(qū)CpG島的高甲基化狀態(tài)可能是導(dǎo)致MDS發(fā)生的一個重要的因素。 然后，采用甲基化特異性(MS)-PCR方法分析30例健康人、72例血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者及85例MDS患者骨髓標(biāo)本的ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化狀況。結(jié)果顯示：(1)ZO-1基因在30例健康人標(biāo)本中均呈完全非甲基化狀態(tài)。(2)72例血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者骨髓標(biāo)本中ZO-1基因也呈完全非甲基化狀態(tài)。提示血液系統(tǒng)非

5、惡性腫瘤疾病的發(fā)生與ZO-1的異常甲基化無關(guān)。推測ZO-1基因啟動子區(qū)的高甲基化狀態(tài)并不影響機(jī)體免疫功能。(3)MDS患者骨髓中ZO-1基因甲基化陽性率(56.5％)明顯高于健康人和血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。(4)MDS各亞類病人骨髓ZO-1基因啟動子區(qū)甲基化陽性率均高于健康人和血液系統(tǒng)非惡性腫瘤患者，其差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。說明ZO-1基因啟動子區(qū)高甲基化在MDS的初始階段就已存在，是M