FISH技術(shù)在骨髓增生異常綜合征中的應(yīng)用與PRAME基因在骨髓增生異常綜合征的表達(dá).pdf

1、第一部分、FISH技術(shù)在骨髓增生異常綜合征中的應(yīng)用
　　 研究背景：克隆性染色體異常是診斷骨髓增生異常綜合征(MDS)的主要依據(jù)之一。同常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)顯帶分析(CC)不同，熒光原位雜交技術(shù)(FISH)不需要細(xì)胞培養(yǎng)，利用位點(diǎn)特異性基因探針可以檢測(cè)間期細(xì)胞的克隆性染色體改變，并可以檢測(cè)出10-20％左右核型正常的MDS的異?？寺?。應(yīng)用FISH技術(shù)，可以提高M(jìn)DS患者染色體異常檢出率，為診斷和治療提供幫助。
　　 目的：本研

2、究對(duì)MDS患者進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)顯帶分析(CC)和FISH檢測(cè)，建立在MDS診斷過(guò)程中的規(guī)范化的FISH檢測(cè)平臺(tái)；比較FISH與常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)方法在檢測(cè)MDS染色體異?？寺≈械牟町?，探討FISH在MDS診斷中的地位。
　　 方法：對(duì)符合維也納最低診斷標(biāo)準(zhǔn)的MDS患者進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞遺傳學(xué)顯帶分析(CC)和FISH檢測(cè)，并搜集患者一般臨床資料。
　　 結(jié)果：1．成功建立包括-5/5q-，+8，-7/7q-，20q-，-Y探針組

3、合的FISH診斷MDS的檢測(cè)平臺(tái)，成功率100%。
　　 2．北京協(xié)和醫(yī)院確診的83例MDS中，兩種方法總的染色體異常檢出率42.2%，其中CC法檢出率30.1%，F(xiàn)ISH陽(yáng)性率33.7%，兩種方法的符合率為76.1%。
　　 3．FISH法較CC法在FAB亞型RA組患者檢出率更高(30.7%VS24.6%，P=0.000)，而在FAB其他組及WHO分型各亞組染色體異常檢出率類似。
　　 4．在IPSS分組中，F(xiàn)

4、ISH法能提高中危1組的檢出率(29.6%VS10%，P=0.049)，而對(duì)中危2患者CC法檢出率更高(81.2%VS62.5%，P=0.036)。
　　 5．CC法檢測(cè)正常或失敗患者中，有11例(19%)患者FISH法檢測(cè)陽(yáng)性，其FAB分型以RA患者為主9例(81.8%);IPSS分組以中危1為主10例(90.9%)。
　　 6．用FISH法與CC法分別進(jìn)行IPSS分組，發(fā)現(xiàn)用兩種方法評(píng)價(jià)IPSS吻合率為86.7%。單

5、純用CC法結(jié)果進(jìn)行IPSS分組將導(dǎo)致3例患者(3.6%)危險(xiǎn)分級(jí)下滑，而單純FISH法結(jié)果進(jìn)行IPSS分組將導(dǎo)致8例患者(9.6%)危險(xiǎn)分級(jí)下滑。
　　 7．兩種方法檢出的染色體異常35例(42.2%)，復(fù)雜核型13例(15.7%)，單一異常核型22例(26.5%)。最常見(jiàn)的染色體異常為+8，共9例，占10.8%，其次為7號(hào)染色體的異常，共7例，占8.4%。
　　 結(jié)論：成功建立FISH技術(shù)在骨髓增生異常綜合征染色體異常

6、的檢測(cè)平臺(tái)，方法穩(wěn)定、靈敏、快速。FISH技術(shù)聯(lián)合CC技術(shù)，可提高骨髓增生異常綜合征患者染色體異常的檢出率。相比CC技術(shù)，F(xiàn)ISH技術(shù)可以提高FAB分型RA組與IPSS分組中危1患者染色體異常的檢出率。FISH技術(shù)因包含探針有限，不能完全替代CC法在骨髓增生異常綜合征檢測(cè)中的作用，但可以相互補(bǔ)充。
　　 第二部分、PRAME基因(PreferentiallyExpressedAntigenofMelanoma)在MDS的表達(dá)及意

7、義
　　 研究背景：黑色素瘤優(yōu)先表達(dá)基因(PreferentiallyExpressedAntigenofMelanoma)是一種腫瘤相關(guān)抗原，廣泛在實(shí)體瘤以及急慢性白血病中高表達(dá)，可用來(lái)作為微小殘留病MRD的監(jiān)測(cè)，并用來(lái)預(yù)測(cè)療效。目前國(guó)內(nèi)外尚沒(méi)有研究其在MDS中的表達(dá)情況。
　　 目的：本研究檢測(cè)PRAME基因在MDS中的表達(dá)情況，探討PRAME基因表達(dá)在MDS診斷和預(yù)后判斷的意義。
　　 方法：采用實(shí)時(shí)定量P

8、CR的方法檢測(cè)66例符合維也納最低標(biāo)準(zhǔn)的MDS患者中PRAME基因的表達(dá)情況，以13例非造血系統(tǒng)腫瘤患者作為陰性對(duì)照，以K562細(xì)胞作為陽(yáng)性對(duì)照。
　　 結(jié)果：1．MDS患者PRAME基因相對(duì)表達(dá)量的中位數(shù)為1.6×10-4(0-8.0)，明顯高于非造血系統(tǒng)腫瘤患者5.3×10-6(0-2.8×10-4)，p＜0.001。13例(20%)的MDS患者PRAME基因表達(dá)陽(yáng)性，其中RA組陽(yáng)性患者8例，陽(yáng)性率17%，RAS組患者1例，

9、陽(yáng)性率14%，RAEB組患者4例，陽(yáng)性率33%。
　　 2．FAB分型、WHO分型、以及IPSS各亞組患者PRAME陽(yáng)性率及表達(dá)水平無(wú)顯著差異。
　　 3．PRAME基因相對(duì)表達(dá)量與骨髓中原粒細(xì)胞比例呈正相關(guān)，r=0.244，P=0.034。
　　 4．骨髓形態(tài)中出現(xiàn)小巨核細(xì)胞的患者PRAME基因表達(dá)的陽(yáng)性率更高，P=0.030.
　　 5．兩例隨診患者PRAME基因的表達(dá)量變化與臨床病情轉(zhuǎn)化相一致。