骨髓增生異常綜合征患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬水平的研究.pdf

1、目的:研究骨髓增生異常綜合征（MDS）患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞 Beclin1、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶點(diǎn)（mTOR）、微管相關(guān)蛋白輕鏈3（LC3）水平，初步探討MDS患者骨髓原代細(xì)胞自噬水平的改變。
　　方法:38例MDS患者為實(shí)驗(yàn)組（MDS組），26例非惡性貧血患者為對(duì)照組。骨髓細(xì)胞鐵染色檢測(cè)骨髓細(xì)胞內(nèi)、外鐵含量和環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞；流式細(xì)胞儀檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞活性氧（ROS）水平；透射電鏡觀察骨髓單個(gè)核細(xì)胞內(nèi)自噬泡數(shù)量；丹（磺）酰戊二胺（M

2、DC）法檢測(cè)骨髓單個(gè)核細(xì)胞自噬泡水平；免疫熒光法觀察觀察骨髓單個(gè)核細(xì)胞中微管相關(guān)蛋白輕鏈3（LC3）蛋白表達(dá)，qPCR法檢測(cè)自噬相關(guān)基因Beclin1、LC3、mTOR mRNA表達(dá)，Western blottiing檢測(cè)Beclin1、LC3蛋白的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　(1)骨髓細(xì)胞鐵染色發(fā)現(xiàn)MDS患者細(xì)胞外鐵、細(xì)胞內(nèi)鐵和環(huán)形鐵粒幼細(xì)胞數(shù)量均較對(duì)照組增加。
　　（2）流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)到MDS組（n=7）患者骨髓單個(gè)核

3、細(xì)胞ROS水平（1352.41±667.51）高于對(duì)照組ROS水平（n=5，596.46±233.99，P＜0.05）。
　?。?）透射電鏡觀察到MDS患者骨髓細(xì)胞內(nèi)存在雙層膜結(jié)構(gòu)自噬泡，內(nèi)含溶酶體。
　?。?）MDC染色發(fā)現(xiàn)MDS組（n=4）染色陽(yáng)性（自噬泡）細(xì)胞數(shù)目比例（9.75％±2.63%）顯著高于對(duì)照組（n=5，2.90%±0.89%， P＜0.05）。
　?。?）免疫熒光法觀察到MDS組（n=4）LC3陽(yáng)性

4、細(xì)胞數(shù)目比例（6.13%±1.03%）顯著高于對(duì)照組（n=4，1.5%±0.58%， P＜0.05）。
　?。?）qPCR法檢測(cè)到低危/中危-1 MDS組（n=14）骨髓單個(gè)核細(xì)胞Beclin1 mRNA表達(dá)水平（3.61±3.02）顯著高于對(duì)照組（n=11，1.55±1.03，P＜0.05）；中危-2/高危MDS組（n=8）Beclin1 mRNA表達(dá)水平為2.63±2.79，高于對(duì)照組，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05；低危/中

5、危-1MDS組（n=10）骨髓單個(gè)核細(xì)胞LC3A mRNA水平(6.56±3.97)顯著高于對(duì)照組（n=7，1.21±0.95，P＜0.05）；低危/中危-1MDS組（n=9）骨髓單個(gè)核細(xì)胞的自噬負(fù)性調(diào)控基因mTOR mRNA水平(0.39±0.37)顯著低于于對(duì)照組（n=9，1.50±1.03，P＜0.05）；中危-2/高危MDS組（n=4）mTOR mRNA表達(dá)水平為1.73±1.69，高于對(duì)照組，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。<