賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌免疫表型及p14AFR和p16INK4a基因變化的對比研究.pdf

1、胃癌是最常見的惡性腫瘤之一。近幾十年來，胃癌總體發(fā)生率有所下降，但胃癌的發(fā)生部位出現(xiàn)了明顯的變化，主要表現(xiàn)在來源于胃遠(yuǎn)端部位（胃竇）胃癌的發(fā)生率明顯下降，而食管胃交界部位（esophagogastric junction，EGJ）遠(yuǎn)端食管腺癌和賁門腺癌的發(fā)生率呈明顯增高趨勢，此變化趨勢在西方國家尤為明顯。初步研究結(jié)果表明，我國居民胃癌的發(fā)生部位也出現(xiàn)類似的變化，從上世紀(jì)90年代后我國北方太行山區(qū)居民賁門腺癌（gastric cardia

2、c adenocarcinoma，GCA）的發(fā)病率呈現(xiàn)逐漸增高的趨勢，具體機(jī)制尚不清楚。 最近有研究提示，賁門腺癌在腫瘤的發(fā)生機(jī)制和生物學(xué)行為方面可能不同于非賁門部位的胃癌，為一種獨(dú)特的胃癌病理學(xué)亞型。Maeda等發(fā)現(xiàn)賁門腺癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率比遠(yuǎn)端胃腺癌（gastric distal adenocarcinoma，GDA）高，且預(yù)后不良。從病因?qū)W角度Hp感染是遠(yuǎn)端胃腺癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素，而在賁門腺癌發(fā)生中的作用卻存在很大爭議。因此，探討不

3、同部位胃癌在生物學(xué)行為、免疫表型和一些關(guān)鍵分子作用機(jī)制方面的可能差異，對進(jìn)一步揭示胃癌發(fā)生部位變化的可能機(jī)制以及胃癌高發(fā)區(qū)居民胃癌的合理防治具有非常重要的意義，是腫瘤工作者面臨的一個(gè)重要挑戰(zhàn)。細(xì)胞周期調(diào)控異常是惡性腫瘤形成的一個(gè)重要機(jī)制。P16INK4a和p14ARF為INK4a/ARF家族成員，二者作為細(xì)胞周期調(diào)控蛋白，作用于細(xì)胞中兩條最主要細(xì)胞周期調(diào)控通路Rb通路（p16rNK4a-Rb）和p53（p14ARF-p53）通路，在腫瘤

4、的發(fā)生、發(fā)展過程中起著關(guān)鍵作用。p16INK4a和p14ARF表達(dá)失活可見于多種人類腫瘤中，比如：皮膚癌、胰腺癌、乳腺癌、食管癌、肺癌、淋巴瘤、結(jié)直腸癌等。胃腸道腫瘤中p16INK4a和p14ARF表達(dá)與腫瘤組織的分化程度、組織分型等密切相關(guān)。目前尚未見有關(guān)p161NK4a和p14ARF在賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌中表達(dá)的對比研究。細(xì)胞角蛋白（Cytokeratins，CKs）和黏蛋白（Mucins，MUC）是確定胃腸道癌免疫表型特征常用的標(biāo)

5、志物。角蛋白是上皮細(xì)胞中的骨架蛋白之一，是上皮細(xì)胞的特征性標(biāo)志物，由分子量不同的角蛋白組成一個(gè)龐大的家族，依據(jù)上皮細(xì)胞類型的不同角蛋白譜不同，可依此確定腫瘤的病理組織學(xué)類型和分化方向。黏蛋白是分布于上皮細(xì)胞表面高度糖化、高分子量的糖蛋白，有MUC1、MUC2等多種類型，其中MUC2為分泌型黏蛋白，主要表達(dá)于腸杯狀細(xì)胞，為胃黏膜腸上皮化生表面標(biāo)志物，與胃癌組織學(xué)類型密切相關(guān)。
　　 為探討賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌在發(fā)生發(fā)展中存在的可能

6、差異，本研究中我們從四個(gè)方面對不同部位胃癌組織進(jìn)行了對比研究。主要包括：1 賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌組織CKs和MUCs免疫表型的對比分析；2 p14ARF和p16XNK4a蛋白在賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌組織中的表達(dá)及意義；3 p14RF和p16INK4a基因在上述不同部位胃癌組織中缺失情況的對比分析；4 賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌組織p14ARF和p16INK4a基因甲基化的對比研究。本文擬通過探討不同部位胃癌之間存在的差異，揭示我國賁門腺癌發(fā)病率

7、升高的原因，為賁門腺癌的防治提供理論依據(jù)。
　　 本研究論文分為四個(gè)部分：
　　 第一部分：賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌CKs和MUCs免疫表型的對比分析
　　 目的：通過各種不同CKs和MUCs表達(dá)變化的對比分析，探討賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌在免疫表型方面的差異。方法：選取2006-2009年河北省磁縣縣醫(yī)院、贊皇縣醫(yī)院以及河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院手術(shù)切除胃癌組織標(biāo)本共99例，其中賁門腺癌50例（腫瘤中心在Z線上1cm和下2c

8、m以內(nèi)），遠(yuǎn)端胃腺癌49例。運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法研究各種不同CKs分子（CK7、CK14、CK19和CK20）和MUCs（MUC1、MUC2和MUC5AC）在賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌中的表達(dá)情況，對比分析不同部位胃癌組織之間CKs、MUCs免疫表型差異性。
　　 第二部分：賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌組織p14ARF和p16INK4a蛋白表達(dá)及其意義的對比研究
　　 目的：比較賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌組織中p16INK4a和p14ARF

9、蛋白表達(dá)的差異。方法：重新選取賁門腺癌44例和遠(yuǎn)端胃腺癌40例，同時(shí)取正常胃黏膜（同期胃癌手術(shù)切除的未受累的胃殘端）25例作為對照。采用免疫組織化學(xué)方法檢測p1 6INK4a和p14ARF蛋白在不同部位胃癌中的表達(dá)情況。
　　 第三部分：賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌組織p14ARF和p16INK4a基因缺失的比較
　　 目的：比較賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌中p161NK4a和p14ARF 抑癌基因位點(diǎn)缺失。方法：選取賁門腺癌44例和遠(yuǎn)

10、端胃腺癌40例，取正常胃黏膜（同期胃癌手術(shù)切除的未受累的胃殘端）1 5例作為對照。分別提取組織DNA，采用PCR方法檢測p1 6INK4a（E1α和E2外顯子）和p14ARF外顯子（E1β和E2外顯子）的缺失情況。
　　第四部分：賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌組織p16INK4a和p14ARF基因甲基化的對比研究
　　 目的：比較不同部位胃癌中p16INK4a和p14ARF基因CpG島甲基化情況，分析賁門腺癌和遠(yuǎn)端胃腺癌中p16I

11、NK4a和p14ARF失活的機(jī)制。方法：本實(shí)驗(yàn)采用甲基化特異性PCR（Methylmion Specific PCR，MSP）對52例賁門腺癌、39例遠(yuǎn)端胃腺癌以及1 5例正常胃黏膜組織中p16INK4a和p14ARF甲基化水平進(jìn)行檢測；同時(shí)提取10例賁門腺癌和8例遠(yuǎn)端胃腺癌新鮮組織總RNA，運(yùn)用Real-time PCR方法檢測胃癌組織中p16INK4a和p14ARF mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論：1.賁門腺癌組織中CK14表

12、達(dá)明顯高于遠(yuǎn)端胃腺癌，而MUC2表達(dá)明顯低于遠(yuǎn)端胃腺癌組織，提示賁門腺癌可能在組織分型及組織學(xué)來源方面與遠(yuǎn)端胃腺癌有所不同。2.賁門腺癌組織中p14ARF和p16INK4a蛋白的表達(dá)均明顯低于遠(yuǎn)端胃腺癌組織，且p14ARF的表達(dá)與腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)；而在遠(yuǎn)端胃腺癌中其表達(dá)與腫瘤分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移均無明顯相關(guān)。因此，賁門腺癌與遠(yuǎn)端胃腺癌組織中抑癌基因p14ARF和p16INK4a在蛋白水平上的表達(dá)及其意義均存在差異。3.p