真菌侵染誘導沉香形成關鍵技術效果評價及結香機制初步研究.pdf

1、沉香是瑞香科植物白木香（Aquilaria sinensis (Lour.)Gilg）含樹脂的木材，是我國、印度及其他東南亞國家的傳統(tǒng)名貴中藥，具有行氣止痛、納氣平喘、溫中止嘔的功效。
　　 同時，其具有濃郁而獨特的香氣，故常被用來制造高級香水、高級香皂、高級香精等。
　　 白木香是國產(chǎn)沉香的唯一植物資源，其樹干在受到損傷或刺激的情況下才能分泌沉香樹脂，但這需要十幾年甚至幾十年的累積。天然沉香的偶然性及長周期性已遠不能滿

2、足市場需求，人們便開始使用各種人工促香方法促進白木香結香并且從未間斷對沉香形成機制的探索。
　　 黑色樹脂形成于沉香屬植物的心材部位，為了找出含有樹脂的木材需要砍倒樹干，導致大量白木香樹遭人為砍伐。白木香本身因木材松軟既沒有藥用價值也無法當建材用，砍伐的白木香樹及其葉、果皮、種子等均被作為廢物處理。本實驗對白木香葉、果皮、種子以及結香部位的化學成分進行了全面分析，在白木香果皮中首次檢出大量沉香的特征性成分：芳香族化合物、倍半萜類

3、和色酮類，發(fā)現(xiàn)白木香果皮提取物表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性。這為全面合理開發(fā)利用白木香植物資源奠定了研究基礎。
　　 雖然白木香結香機制尚未明確，但普遍認為與其內(nèi)生真菌有著密切關系。本課題組使用新的“生物法”—無創(chuàng)傷的“小孔滴注法”。無創(chuàng)傷方法既可排除白木香樹干組織受到大面積的物理傷害，又能避免外源環(huán)境微生物對樹干組織的侵染，從而保障了真菌對沉香誘導作用研究結果的可靠性。為了使“小孔滴注法”人工接種沉香既能實現(xiàn)快速結香又能讓其品質(zhì)達到

4、藥典的要求，運用GC-MS分析技術和分子生物學技術研究白木香結香過程中化學成分和結香前后內(nèi)生真菌群落構成的動態(tài)變化，得出一定的動態(tài)變化規(guī)律并篩選出可快速誘導沉香形成的優(yōu)勢菌株；同時，建立了測定沉香中芐基丙酮含量的氣相色譜法，為沉香質(zhì)量全面評價體系奠定基礎。
　　 鐮刀菌屬于子囊菌亞門，它是大部分白木香分離培養(yǎng)研究中均獲得的常見內(nèi)生真菌，我們也從白木香中分離到了，因此選擇鐮刀菌進行人工造香試驗。建立了“小孔滴注法”人工造香21個月

5、白木香葉內(nèi)生真菌rDNA ITS 區(qū)克隆文庫，共獲得28 條序列，分屬刺盤孢屬、擬盤多毛孢屬、擬莖點霉菌、球座菌屬、曲霉屬、核盤霉屬、子囊菌等。其中刺盤孢屬、擬盤多毛孢屬、擬莖點霉菌為較優(yōu)勢菌，分別占文庫的35.7％、10.7％、7.14％。而健康白木香（未結香）葉內(nèi)生真菌rDNA ITS 區(qū)克隆文庫，得到10條序列，分屬刺盤孢屬、球腔菌屬、枝氯霉屬等。二者均具有的內(nèi)生真菌群落只有刺盤孢屬（Collectrotrichum），說明白木香