過氧化氫酶與天然抗氧化劑抗氧化協(xié)同作用測定方法研究.pdf

1、過氧化氫酶是一種廣泛存在于生物組織中的氧化還原酶，主要生理功能是催化過氧化氫分解為水和氧氣，防止細(xì)胞過氧化，與超氧化物歧化酶、過氧化物酶和抗壞血酸過氧化物酶一起被稱為生物體系的酶防御系統(tǒng)。自由基是機體新陳代謝的產(chǎn)物，在體內(nèi)大量積累會造成機體的氧化損傷，從而引發(fā)多種疾病。抗氧化劑可以清除自由基或活性氧，在病理學(xué)和飲食中起著非常重要的作用。近年來很多實驗轉(zhuǎn)向研究抗氧化劑間的協(xié)同作用，以尋找高效的復(fù)合抗氧化劑。本文主要在以下幾方面進(jìn)行了研究:

2、
　　 1、建立了基于鉬酸銨顯色的高效液相色譜法測定過氧化氫酶活性的方法。實驗研究了流動相的組成、pH、比例及流速對反應(yīng)體系分離的影響，得到的最優(yōu)的色譜條件為流動相:甲醇-0.5％冰乙酸水溶液(pH2.9)(40:60(V/V));流速:0.5mL/min進(jìn)樣體積:20μL;檢測波長:405nm;柱溫:室溫。研究了酶活測定體系中催化時間、鉬酸銨加入量及鉬酸銨與過氧化氫反應(yīng)時間對產(chǎn)物生成量的影響。在最優(yōu)色譜條件下，體系中各物質(zhì)在6

3、min內(nèi)即可分離完成。產(chǎn)物峰面積和遷移時間的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.36％和0.03％，檢出限(S/N=3)為2.58×10-6mol/L。該法可用于過氧化氫酶活性的測定。
　　 2、在抗壞血酸/Fe2+的羥自由基產(chǎn)生體系中，以苯甲酸為羥自由基捕獲劑，建立了毛細(xì)管電泳測定過氧化氫酶對羥自由基清除率的分析方法。優(yōu)化了背景緩沖液的pH值、電解質(zhì)濃度、表面活性劑濃度及分離電壓。優(yōu)化的電泳條件為:緩沖液pH9.2，電解質(zhì)濃度為10mmol

4、/L，表面活性劑濃度為30mmol/L;分離電壓為20kV。在最優(yōu)電泳條件下，研究了羥自由基產(chǎn)生體系中各底物濃度和反應(yīng)時間對產(chǎn)物生成量的影響。所建立的方法可在15min內(nèi)實現(xiàn)體系中的各物質(zhì)的分離;產(chǎn)物間羥基苯甲酸的線性范圍是5×10-6～1×10-3mol/L，檢出限為2.8×10-7mol/L。方法可用于過氧化氫酶對羥自由基清除率的測定。
　　 3、研究了天然抗氧化劑原花青素和綠原酸獨立抗氧化作用和與過氧化氫酶的協(xié)同抗氧化作用