從Leptin-AMPK調(diào)脂通路研究黃連吳茱萸配伍降血脂作用機制.pdf

1、目的：
　　本實驗以高脂血癥模型大鼠為載體，黃連吳茱萸配伍1：1（小檗堿吳茱萸堿配伍）為研究對象，考察黃連吳茱萸配伍的降血脂作用，以Leptin-AMPK信號通路為靶點研究其降脂作用機制，揭示黃連吳茱萸的配伍機理。
　　方法：
　　本實驗采用SD雄性大鼠108只，造模期間隨機抽取12只作為空白對照組，其余均為模型組。以自由進食高脂飼料方式建立大鼠高脂血癥模型，造模期間每天記錄大鼠一般情況及飼料消耗量，每3天記錄體重變化

2、。每周隨機抽取6只大鼠（空白對照組3只，模型組3只）尾靜脈取血檢測血清膽固醇（TC）、甘油三酯(TG)水平，以評價造模是否成功。造模第6周，隨機抽取的模型組大鼠血清TC水平較空白對照組顯著升高，約為空白對照組2倍，提示造模成功。
　　造模成功后，除空白對照組外，所有大鼠按血脂水平隨機分為8組，即模型組、陽性藥組（辛伐他汀）（10mg/k g）、小檗堿高劑量組（72.8mg/k g）、小檗堿低劑量組（36.4mg/k g）、吳茱萸堿

3、高劑量組（16.8mg/k g）、吳茱萸堿低劑量組（8.4mg/k g）、配伍高劑量組（89.1mg/k g）、配伍低劑量組（44.6mg/k g），共9組，每組8只；空白對照組灌胃CMC溶液，給藥體積1ml/100g。給藥期間，除空白對照組進食普通飼料外，其余均進食高脂飼料。給藥期間，每天記錄大鼠一般情況（毛發(fā)、活動、糞便、精神狀態(tài)）及飼料消耗量，每3天記錄體重變化。
　　連續(xù)給藥60天，實驗結(jié)束前一天，禁食不禁水16小時。末次

4、給藥后，腹主動脈取血，分離血清，檢測血脂水平（膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白）及血清瘦素（Leptin）含量。手術(shù)分離大鼠肝臟拍照記錄其外形并稱重，計算肝指數(shù)，Elisa試劑盒檢測肝臟TC、TG，進行肝臟組織病理形態(tài)學(xué)檢測。
　　Western blot方法檢測肝臟單磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）、乙酰輔酶A羧化酶（ACC）、肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶-1（CPT1）蛋白表達(dá)，RT real-time PCR方法檢測肝臟A

5、MPK、ACC、CPT1基因表達(dá)。統(tǒng)計實驗數(shù)據(jù)并分析。
　　結(jié)果：
　　1、實驗性高脂血癥大鼠模型的建立與評價
　　正常對照組大鼠一般情況良好。模型組大鼠食量減少，個別大鼠皮毛萎黃聳立，無光澤；大便稀溏，排泄物較多，異味重；精神亢奮，活動增加。
　　造模期間，模型組大鼠體重顯著低于空白對照組（P＜0.01）。造模第六周，模型組大鼠血清TC水平顯著高于空白對照組（P＜0.01），約為空白對照組2倍，提示造模成功。<

6、br>　　2、黃連吳茱萸配伍對高脂血癥大鼠體重水平的影響
　　模型組大鼠體重較空白對照組降低（P<0.05）。等倍數(shù)劑量組比較，配伍高劑量組體重升高顯著（P<0.01），其體重水平高于單用小檗堿、吳茱萸堿。
　　3、黃連吳茱萸配伍對血脂水平的影響
　　給藥60天后，配伍高劑量組降低血清TC、LDL作用顯著（P<0.01），低于單用小檗堿、吳茱萸堿。各給藥組對血清TG無改善作用。模型組大鼠血清HD L值低于空白對照組，但

7、無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　4、黃連吳茱萸配伍對肝臟指數(shù)、肝臟TC、TG及肝臟病理的影響
　　模型組大鼠肝指數(shù)較空白對照組顯著升高（P<0.01），各給藥組對肝指數(shù)均有改善作用（P<0.01）。等倍數(shù)劑量組比較，配伍高、低劑量組肝指數(shù)均低于等倍數(shù)劑量組單用小檗堿、吳茱萸堿。模型組大鼠肝臟TC、TG較空白對照組顯著升高（P<0.01）。吳茱萸堿高、低劑量組肝臟TC、TG水平低于等倍數(shù)劑量下小檗堿及配伍組。
　　空白對照組肝細(xì)胞正

8、常或極輕度脂肪變性。模型組肝細(xì)胞重度脂肪變性。各給藥組大鼠的肝組織為肝細(xì)胞輕度或中度脂肪變性（P＜0.01）。
　　5、黃連吳茱萸配伍降血脂與Leptin-AMPK信號通路蛋白表達(dá)的關(guān)系
　　模型組大鼠血清Leptin較空白對照組顯著降低近8倍（P＜0.01）；配伍低劑量組Leptin水平高于小檗堿、吳茱萸堿低劑量組。
　　給藥60天后，模型組AMPK-P、ACC-P、CPT1蛋白表達(dá)較空白對照組降低。相對于模型組，配

9、伍低劑量組AMPK-P、ACC-P、CPT1水平高于單用小檗堿、吳茱萸堿。
　　6、黃連吳茱萸配伍降血脂與Leptin-AMPK信號通路基因表達(dá)的關(guān)系
　　給藥60天后，模型組AMPK、ACC、CPT1基因表達(dá)較空白對照組降低。相對于模型組，配伍低劑量組AMPK、CPT1水平高于單用小檗堿、吳茱萸堿。
　　結(jié)論：
　　黃連吳茱萸辛開苦降配伍具有降血脂功效，在改善高脂血癥大鼠體重、下調(diào)血清TC、LDL水平、降低肝指