FTY720對(duì)腫瘤免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、背景：FTY720作為新型免疫抑制劑，在自身免疫病等炎癥相關(guān)疾病中顯示良好的治療效果，已被被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于多發(fā)性硬化病的臨床治療。目前的研究表明，F(xiàn)TY720的主要作用機(jī)制是通過(guò)結(jié)合1-磷酸鞘氨醇（S1P）受體，促使其內(nèi)化，阻斷或下調(diào)S1P介導(dǎo)的信號(hào)傳遞，從而發(fā)揮功能性拮抗劑的作用，阻滯效應(yīng)性淋巴細(xì)胞于淋巴器官中，減少病灶組織中的效應(yīng)細(xì)胞的浸潤(rùn)，從而抑制疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來(lái)的研究發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)TY720對(duì)腫瘤細(xì)胞同樣有著良好的抑制效果，

2、能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。然而，大量研究證實(shí)，腫瘤微環(huán)境，特別是腫瘤免疫微環(huán)境在腫瘤發(fā)生發(fā)展中起著非常重要的作用。腫瘤細(xì)胞能夠分泌多種生長(zhǎng)因子/趨化因子，刺激骨髓或髓外造血器官中髓系細(xì)胞的異常分化和增生，造成具有免疫抑制功能的不成熟的髓系細(xì)胞MDSC在各器官和腫瘤周圍的大量聚集，破壞機(jī)體的免疫監(jiān)視，這被認(rèn)為是腫瘤免疫微環(huán)境形成的關(guān)鍵步驟。因此，我們提出以下科學(xué)問(wèn)題：FTY720作為公認(rèn)的免疫調(diào)節(jié)劑，是否影響腫瘤免疫微環(huán)境，特別是MDSC的累

3、積，進(jìn)而調(diào)控癌細(xì)胞的生長(zhǎng)？為此，我們將在已建立的多個(gè)荷瘤模型中，評(píng)價(jià)FTY720的效應(yīng)。并以MDSC的異常增生為研究著力點(diǎn)，探究FTY720對(duì)髓外造血和MDSC累積的影響及其機(jī)制。
　　目的：探討FTY720在腫瘤生長(zhǎng)中的作用及其機(jī)制。
　　方法：在UC相關(guān)結(jié)直腸癌（CAC）的小鼠模型模型和移植瘤模型上，每天口服FTY720（1mg/kg/天），直至實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，設(shè)立FTY720末期治療組（CAC建模后開始口服FTY720，劑

4、量同上，直至實(shí)驗(yàn)）。每天測(cè)量腫瘤尺寸，計(jì)算腫瘤體積。分離脾臟組織，病理分析和流式細(xì)胞術(shù)判斷髓外造血，同時(shí)借助流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組織器官中的MDSC數(shù)量。ELISA和定量RT-PCR檢測(cè)血漿中和細(xì)胞內(nèi)GM-CSF含量。FACS分選MDSC，予以S1P和相應(yīng)的激動(dòng)劑/拮抗劑體外刺激，定量RT-PCR檢測(cè)GM-CSF表達(dá)；2.建立CT26和B16移植瘤模型；3.建立CAC模型的評(píng)價(jià)體系；4.通過(guò)灌胃途徑評(píng)價(jià)藥物對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的影響5.由病理切片判斷

5、髓外造血情況；6.檢測(cè)小鼠外周血、脾臟、骨髓以及結(jié)腸病灶部位MDSC的含量；7.FACS或磁珠分選外周血MDSC；8.檢測(cè)小鼠血漿以及MDSC中GM-CSF表達(dá)水平。9.FACS和QPCR檢測(cè)CAC模型中S1P受體的表達(dá)；10.S1P以及S1P受體拮抗劑和激動(dòng)劑體外刺激MDSC對(duì)GM-CSF釋放的影響。
　　結(jié)果：FTY720小鼠的腫瘤負(fù)荷明顯增加。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，荷瘤小鼠MDSC細(xì)胞高表達(dá)，可有效抑制淋巴細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步研究F

6、TY720驅(qū)動(dòng)髓外造血和MDSC累積的機(jī)制發(fā)現(xiàn)FTY720灌胃后GM-CSF高表達(dá)。腹腔注射GM-CSF抗體，可明顯阻斷FTY720效應(yīng)，S1P受體3激動(dòng)劑刺激MDSC可顯著促進(jìn)GM-CSF的表達(dá)，S1PR1激動(dòng)劑刺激則無(wú)此效應(yīng)?？诜1PR3激動(dòng)劑Cym5541可促進(jìn)CAC模型小鼠的髓外造血和MDSC累積。
　　結(jié)論：證實(shí)了FTY720可促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展。對(duì)其作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，口服FTY720可顯著促進(jìn)脾臟的髓外造血從而導(dǎo)致