FTY720抗癲癎發(fā)作及癲癎發(fā)生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、癲癇是一種常見(jiàn)病多發(fā)病，具有反復(fù)發(fā)作性，每次發(fā)作的不可預(yù)知性以及藥物治療的長(zhǎng)期性等臨床特點(diǎn)。發(fā)病年齡涵蓋從新生兒至老年人各個(gè)年齡段，全球約5千萬(wàn)患者，嚴(yán)重影響患者身心健康，給社會(huì)和家庭帶來(lái)沉重負(fù)擔(dān)。盡管不斷有新的抗癲癇藥物問(wèn)世，癲癇的治愈率并沒(méi)有明顯提高，約30％的患者抗癲癇藥物治療無(wú)效，稱(chēng)為難治性癲癇。在難治性癲癇中，一大部分是各種腦損傷后引起的癥狀性癲癇。腦損傷后通常經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的潛伏期，腦組織發(fā)生結(jié)構(gòu)及功能的改變使得神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)興奮性

2、升高，然后出現(xiàn)自發(fā)的癲癇發(fā)作。這種由“正常腦”轉(zhuǎn)變?yōu)椤鞍d癇腦”的過(guò)程稱(chēng)為癲癇發(fā)生。近年來(lái)，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)炎癥在癲癎發(fā)作及癲癎發(fā)生過(guò)程中扮演了重要的角色，某些抗炎治療在癲癎動(dòng)物模型上顯示出一定的抗癲癇發(fā)作及癲癇發(fā)生的作用，結(jié)合部分難治性癲癎患者加用抗炎治療也能取得滿意療效，說(shuō)明抗炎治療是一條可能治療癲癇的新途徑。
　　芬戈莫德（FTY720）是一種已被臨床批準(zhǔn)使用的抗炎新藥，在多發(fā)性硬化患者的治療中取得良好的療效。盡管目前機(jī)制尚不清，

3、研究表明FTY720的作用主要是經(jīng)過(guò)各種途徑抑制病理狀態(tài)下中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥而實(shí)現(xiàn)的。因此在本研究中我們應(yīng)用電生理技術(shù)、行為學(xué)及免疫組化等方法觀察了FTY720抗癲癇發(fā)作及抗癲癇發(fā)生的作用，并探討其潛在的機(jī)制，以期為臨床治療癲癇提供新的方法。
　　首先我們?cè)陔x體腦片上驗(yàn)證了一種誘發(fā)腦內(nèi)炎癥的藥物細(xì)菌脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）對(duì)癲癎樣放電的影響，一方面從離體證實(shí)炎癥在癲癎中的作用，另一方面探索炎癥影響癲癎的

4、電生理機(jī)制。結(jié)果如下：1、急性LPS暴露易化了海馬CA1錐體細(xì)胞的癲癎樣放電；2、急性LPS暴露增加了海馬CA1錐體細(xì)胞的興奮性突觸后電流的強(qiáng)度，但對(duì)抑制性突觸后電流無(wú)影響；3、急性LPS暴露增加了海馬CA1錐體細(xì)胞的興奮性，但未改變基強(qiáng)度下第一個(gè)動(dòng)作電位的幅值和半波寬。提示急性炎癥易化癲癎樣放電的可能機(jī)制是增強(qiáng)興奮性突觸傳遞及細(xì)胞興奮性，這可能是炎癥誘發(fā)癲癎的電生理基礎(chǔ)，并為下一步研究抗炎藥物 FTY720對(duì)癲癎的影響奠定了離體實(shí)驗(yàn)基

5、礎(chǔ)。
　　其次，我們觀察了FTY720在MES、PTZ急性驚厥模型及匹羅卡品癲癎模型上抗癲癎發(fā)作的作用，并初步探討了其潛在的機(jī)制。結(jié)果如下：1、FTY720在0.25 mg/kg及1 mg/kg劑量腹腔注射30min后對(duì)MES模型無(wú)效。2、FTY720在0.25 mg/kg腹腔注射30min后對(duì)PTZ急性驚厥模型最小陣攣發(fā)作（Minimal clonic seizure，MCS）、全身強(qiáng)直陣攣性發(fā)作（Generalized ton

6、ic-clonic seizure，GTCS）的潛伏期及動(dòng)物死亡率均無(wú)影響，但可以減少GTCS的發(fā)作時(shí)間；1 mg/kg腹腔注射能明顯延長(zhǎng)MCS和GTCS的潛伏期，減少GTCS的發(fā)作時(shí)間，提高動(dòng)物存活率。3、FTY7201 mg/kg腹腔注射30min后對(duì)匹羅卡品誘導(dǎo)大鼠癲癎持續(xù)狀態(tài)的比例及死亡率無(wú)影響，但能延長(zhǎng)SE潛伏期。4、離體腦片上，LPS增加了海馬CA1區(qū)興奮性突觸后電位的幅值；0.1-10μM的FTY720-P對(duì)LPS導(dǎo)致的興

7、奮性突觸后電位增加無(wú)影響而100μM FTY720-P明顯降低了LPS誘導(dǎo)的興奮性突觸后電位；100μM FTY720-P對(duì)正常的興奮性突觸后電位無(wú)影響。以上結(jié)果說(shuō)明FTY720有一定的抗癲癎發(fā)作的藥理作用，這種作用有劑量依賴(lài)性。其潛在的機(jī)制可能是抑制了病理狀態(tài)下興奮性突觸傳遞的增加。
　　既然 FTY720有抗癲癎發(fā)作、減少異常興奮性突觸傳遞以及文獻(xiàn)報(bào)道的抗炎作用，那么能否對(duì)癥狀性癲癎形成過(guò)程即癲癎發(fā)生期異常興奮的神經(jīng)環(huán)路產(chǎn)生抑

8、制從而起到減少后期癲癎的自發(fā)發(fā)作呢？為證實(shí)這一假設(shè)，在最后一部分實(shí)驗(yàn)中我們?cè)诖笫蟀d癎持續(xù)狀態(tài)（Status epilepticus，SE）后24小時(shí)予以1 mg/kg FTY720腹腔注射，每天1次，連續(xù)注射14天，觀察了癲癎發(fā)生期海馬神經(jīng)環(huán)路興奮性及慢性期大鼠癲癎自發(fā)發(fā)作的變化；同時(shí)觀察了腦內(nèi)海馬的炎癥反應(yīng)程度如小膠質(zhì)細(xì)胞、星型膠質(zhì)細(xì)胞的激活程度，細(xì)胞因子IL-1β和TNFα含量的變化；還觀察了導(dǎo)致癲癎發(fā)生的常見(jiàn)病理改變?nèi)绾ｑR神經(jīng)元的

9、變性丟失及苔蘚纖維芽生的變化情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：1、在SE后21-34天的視頻檢測(cè)中，F(xiàn)TY720明顯降低了出現(xiàn)癲癎自發(fā)發(fā)作大鼠的數(shù)量，減輕了癲癎發(fā)作的頻率、持續(xù)時(shí)間和嚴(yán)重程度。2、SE后第4天，大鼠海馬IL-1β和TNFα的含量明顯升高，但FTY720治療組明顯低于生理鹽水治療組；FTY720治療組海馬 CA1、CA3和門(mén)區(qū)的星型膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)目也明顯低于生理鹽水治療組； FTY720的治療還減輕了海馬各區(qū)神經(jīng)元的變性。3、SE后

10、第7天，F(xiàn)TY720治療組大鼠海馬神經(jīng)環(huán)路興奮性較生理鹽水治療組明顯下降。4、SE后第35天，F(xiàn)TY720治療顯著減輕 Timm染色標(biāo)記的苔蘚纖維芽生程度。結(jié)果說(shuō)明抗炎藥物 FTY720能夠改善SE后癲癎發(fā)生期海馬的炎癥反應(yīng)程度，減少神經(jīng)元變性，降低異常興奮的神經(jīng)環(huán)路形成，最終緩解了慢性期癲癎的自發(fā)發(fā)作。
　　綜上所述，模擬急性炎癥的LPS暴露可以通過(guò)增加興奮性突觸傳遞和神經(jīng)元的興奮性來(lái)易化離體誘導(dǎo)的癲癎樣放電；FTY720抑制興