樹突狀細胞在癲癎腦內的分布與來源研究.pdf

1、目的：癲癎是一組由不同病因所引起的腦部神經(jīng)元高度同步化，且常具有自限性的異常放電所致的，以發(fā)作性、短暫性、重復性及通常為刻板性的中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能失常為特征的綜合征。近期研究表明免疫機制廣泛參與了癲癎發(fā)生及難治性癲癎形成過程。樹突狀細胞（Dendritic cells,DCs）是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞(Antigen presenting cells,APC)，對免疫反應的發(fā)展發(fā)揮重要作用。近期研究表明，在腦損傷后的炎癥反應以及神

2、經(jīng)退行性病變中，樹突狀細胞可在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內聚集，并參與腦內的免疫反應。目前尚未見樹突狀細胞與癲癎相關研究報道。因此，本課題以樹突狀細胞為切入點，觀察癲癎患者及氯化鋰－匹魯卡品致癎大鼠腦內樹突狀細胞的分布。
　　方法：
　　1、選用2010年4月至10月我院神經(jīng)外科手術切除癲癎6例患者（全面性發(fā)作5例，部分性發(fā)作1例）腦組織，使用CD11c（樹突狀細胞標志物）抗體進行免疫組織化學染色，檢測癲癎患者腦內樹突狀細胞。
　　

3、2、選用氯化鋰－匹魯卡品誘導大鼠癲癎發(fā)作模型，將成年雄性SD大鼠在癲癎發(fā)作后12h，1d、3d、5d、7d、12d、30d處死，使用OX62（樹突狀細胞表面標志物），進行免疫組織化學染色，檢測致癎大鼠腦內樹突狀細胞時間、空間變化。免疫熒光雙標法檢測小膠質細胞與樹突狀細胞。
　　3、使用60Co射線對大鼠照射，破壞外周DCs來源，即殺滅骨髓及外周血液內具有分化為樹突狀細胞能力的造血干細胞和淋巴細胞，3天后，尾靜脈血涂片MGG染色觀察

4、外周血液淋巴細胞數(shù)目，建立氯化鋰－匹魯卡品誘導大鼠癲癎，選取SE后1、3天時間點，使用OX62，進行免疫組織化學染色，檢測致癎大鼠腦內樹突狀細胞。
　　結果：
　　1、在6例癲癎患者手術切除腦組織標本中，3例患者的海馬及顳葉皮質中發(fā)現(xiàn)CD11c陽性樹突狀細胞，胞體呈圓形，表面有2－3個突起，散在分布于腦實質。
　　2、正常大鼠腦內未見明顯OX62陽性樹突狀細胞表達。癲癎發(fā)作后1天，樹突狀細胞開始浸潤腦組織，樹突狀細胞數(shù)

5、量在3-5天達到高峰，12h、7天、30天均未見樹突狀細胞表達。樹突狀細胞主要分布于致癎大鼠顳葉皮質及丘腦部位(包括丘腦外側背核、中內外側核、丘腦前背側核、丘腦外側后核、丘腦后核)。免疫熒雙標法檢測致癎大鼠顳葉皮質及丘腦部位未見小膠質細胞與OX62陽性樹突狀細胞雙標。
　　3、大鼠照射60Co后，尾靜脈血涂片MGG染色顯示，與對照組相比，60Co照射組大鼠外周血內淋巴細胞數(shù)目顯著減少，建立氯化鋰－匹魯卡品癲癎模型后1、3天，大鼠腦